Teórico explicativo 1 CONTENCIÓN Y MANEJO DE ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN. OBTENCION DE MUESTRAS Contención y manejo de roedores y sapos. Toma de muestras.

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1 Teórico explicativo 1 CONTENCIÓN Y MANEJO DE ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN. OBTENCION DE MUESTRAS Contención y manejo de roedores y sapos. Toma de muestras. Uso de Anticoagulantes. Bioseguridad. Permioselectividad de las membranas. Osmolalidad. Tonicidad. Medio interno. Compartimentos líquidos. Cálculo. Medición de electrolitos séricos y urinarios -2016-

2 Contención y manejo de animales de experimentación Roedores Batracios buffo arenarum

3 Obtención de muestras Es fundamental que la muestra sea obtenida y conservada correctamente para garantizar los resultados

4 Obtención de muestras de sangre Capilar Venosa Arterial

5 Punción capilar Lanceta de Franke

6 Punción venosa 25 mm de largo y 0,8 mm de calibre, con bisel corto ( 5, 10 o 20 ml)

7 Punción arterial

8 Procesamiento de la muestra de sangre Sangre entera : con anticoagulante; sin centrifugación Suero : sin anticoagulante; con centrifugación Plasma : con anticoagulante; con centrifugación Plasma o suero??

9 Se solicita al paciente que recolecte en un envase limpio todas las muestras de orina que emita durante 24 h, excluyendo la primera orina de la mañana del primer día de recolección y finalizando a la misma hora del día posterior en que comenzó a tomar la muestra Análisis de orina completa: primera orina de la mañana Análisis bacteriológico: primera orina de la mañana Análisis cuantitativo: Orina de 24 hs Obtención de muestras de orina

10 Bioseguridad Seguridad y protección de todo lo viviente Accidente Accidente: suceso inesperado que en forma veloz y repentina ocasiona interrupción o interferencia de la tarea

11 Bioseguridad -Riesgo químico -Riesgo eléctrico -Riesgo de incendio -Riesgo biológico

12 Bioseguridad Normas prácticas No pipetear con la boca No comer, fumar, tomar mate, beber, ni aplicar cosméticos No tener materiales que no se relacionen con el trabajo Descontaminar las superficies una vez al día Usar guantes No ingresar persona extrañas sin información No llevar las manos a la boca Lavarse las manos todas las veces que sea necesario No usar joyas en las manos Personas con lesiones en la piel no trabajar con material biológico Todo material biológico se considera potencialmente infeccioso Una vez usados todos los equipos se deben desinfectar

13 El organismo de regulación para las Aguas lavandinas es el ANMAT Según normas IRAM se clasifican en - lavandina común: contenido de cloro activo mínimo 20 g/l y máximo 40 g/l - lavandina tipo II o concentrada : contenido de cloro activo min55 g/l y max 65 g/l - lavandina tipo III : contenido de cloro activo mínimo 85 g/l y máximo100 g/l Se conservan en lugar fresco, tapadas y hasta 4 meses ( si no hace mucho calor). Equivalencias: 50 g/l o 5 % 5 g/l o 0,5 % 0,5% = 5000ppm = 5 g/l Fórmula para preparar una solución clorada diluida : Partes de agua totales a agregar = [% concentrado original ÷ % de concentración deseada] - 1 [5,0%÷0,5%] -1 = 9 (agregar 9 partes de agua a una parte de lavandina al 5,0% (solución comercial), dejando actuar 20 minutos como mínimo. OMS: Como solución desinfectante general …. concentración de 1 g/l de cloro libre. En caso de derrame que conlleve un peligro biológico y en presencia de grandes cantidades de materia orgánica, se recomienda utilizar …… 5 g/l de cloro libre.

14 El mantenimiento del volumen y la composición de los líquidos corporales es esencial para la homeostasis Homeostasis: término acuñado (1928) por Walter B. Cannon, es un estado de constancia relativa del medio interno. Describe todos los procesos fisiológicos coordinados por medio de los cuales, el medio interno del organismo se mantiene en un estado de equilibrio Líquidos corporales

15 El MEDIO INTERNO es un concepto definido por Claude Bernard a finales del siglo XIX, para indicar el medio hidrosalino de un organismo, con sus propiedades fisico-químicas correspondientes, que riega a todas y cada una de sus células “mar interior que baña las células”

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18 Ingestión y pérdidas de agua diarias Ingestión líquidos ingeridos: 2100 ml/día síntesis por oxidación de hidratos de carbono: 200ml /día Pérdida sudor: 100 ml/día (dep de la Tº) insensible: piel y pulmones: 700 ml/día orina: 1400 ml/día heces: 100 ml/día

19 Normal Ejercicio intenso y prolongado Ingresos Líquidos ingeridos 2.100 ? Del metabolismo 200 200 Total de ingresos 2.300 ? Pérdidas Insensibles: piel 350 350 Insensibles: pulmones 350 650 Sudor 100 5.000 Heces 100 100 Orina 1.400 500 Total de pérdidas 2.300 6.600

20 Compartimientos de líquido corporal El agua es el componente mas abundante del cuerpo. El agua corporal total representa del 50 al 70% del peso corporal Para adulto de 70 Kg el 60% del peso corporal es agua (42litros). Ésta se distribuye en  el compartimiento intracelular (2/3 del agua corporal total – 28 litros).  el compartimiento extracelular (1/3 del agua corporal total – 14 litros).:  Plasma sanguíneo: 1/4  Líquido intersticial: ¾  Líquido cristalizado de hueso y de tej conectivo denso  Líquidos transcelulares: liq sinovial,LCR, pleural, peritoneal, pericárdico, GI, biliar, urinario (1 a 2 litros)

21 Distribución de los compartimientos

22 Volumen sanguíneo La sangre contiene líquido extracelular e intracelular El volumen sanguíneo es 7% del peso corporal = 5 lt.( 60% plasma y 40% glóbulos rojos )

23 Cambios en el volumen de sangre

24 Cambios en el volumen de sangre: deshidratación

25 Agua corporal Variaciones fisiológicas

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27 Medición de los compartimientos método de dilución : vol B = vol A x conc A conc B Si se dispersa 1 ml de una solución que contiene 10 mg/ml de colorante en la cámara B y la concentración final en la cámara es de 0,01 mg por cada mililitro de líquido, el volumen desconocido de la cámara puede calcularse: Volumen B = 1 ml x10 mg/ml = 1.000 ml 0,01 mg/ml

28 Método de dilución El material inyectado no debe ser tóxico Debe distribuirse en el compartimiento No debe ejercer efecto sobre la distribución del agua Debe permanecer inalterada durante la difusión Medido con relativa facilidad VolumenIndicadores ACT 3 H 2 O, 2 H 2 O, antipirina. LEC 22 Na +, inulina, tiosulfato LICACT-LEC Volumen Plasmático 125 l-albúmina, azul de Evans (T-1824) Volumen SanguíneoHematíes marcados con 51 Cr; Vol Sang = Vol plasm / (1-Hto) Líquido intersticialVLEC - V Plasmático

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30 Método de dilución Errores:  ACT: Antipirina: distribución mas lenta. Ligera subestimación  LEC: Radioisótopos de iones: penetran en las células. Sobreestimación Sacáridos no metabolizables: no se distribuyen fácilm, poco en tej óseo. Subestimación  Plasma : se descart Alb que ingresa al intersticio Hto: subestima el valor real

31 Fenómenos osmóticos

32 Osmosis: movimiento de las moléculas del solvente, a través de una membrana hacia un área en la cual existe mayor concentración de soluto para el cual es impermeable la membrana Las moléculas del solvente difundirán desde la región donde su actividad es mayor (la solución diluída) hacia aquella región donde su actividad es menor (la solución concentrada Presión osmótica: presión necesaria para detener la ósmosis

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34 Todos los líquidos corporales son isosmóticos? A que se debe la ligera osmolalidad mayor del plasma? A pesar de la alta concentración de proteínas en el LIC, porque la osmolalidad no es mayor que en liq intersticial? Cual es una importante consecuencia de que los principales liq corporales sean isosmóticos?

35 Osmolaridad: número de partículas osmoticam activas(osmol) / lt de solución Osm = g x C donde Osmolaridad = Concentración de partículas (mOsm /l) g = Número de partículas por mol en solución (mOsm /m mol ) C = Concentración (mmol /l) Osmolalidad: osmol/Kg agua (independiente de la temp y del volumen ocupado por los solutos de la solución)

36 En soluciones diluidas como los líquidos corporales estos términos pueden usarse como sinónimos (la diferencia entre osmolalidad y osmolaridad es < 1%) La osmolalidad es una medida de la concentración total de partículas: Ca 2+ SO 4 2- SO 4 Na 2 ………………… SO 4 2- Na + Na + Albúmina Na + NaCl…. Na+ Cl- El factor que determina la presión osmótica es el número de partículas, no la masa

37 Ej: solución de NaCl 0,85 % = 290 mOsm/l Isosmótica e isotónica Cálculo de la osmolalidad de una solución NaCl 0,85% PM 58,5 g 58,5 g ------------ 1mol 0,85 g----------- x= 0,0145 moles --------------- 100 ml 0,145 moles/l ------------1000 ml 145 mmoles /l de NaCl 2 x 145 = 290 mOsmoles/l

38 π = g C σ R T (atm) : ley de van’t Hoff donde π = Presión osmótica (atm o mmHg) g = Número de partículas por mol en solución (Osm/mol) C = Concentración (mmol/l) σ = Coeficiente de reflexión (varía de 0 a 1); 1: membrana impermeable y 0: membrana permeable. R = Constante de los gases (0,0821 - atm/mol - K ) T = Temperatura absoluta (K ) El coeficiente de reflexión describe la facilidad con la que un soluto cruza una membrana. Presión osmótica

39 Presión oncótica La presión oncótica es la presión osmótica generada por las moléculas de gran tamaño (sobre todo, las proteínas) en una solución. La presión osmótica generada por una solución de proteínas no cumple la ley de van’t Hoff.

40 Cuando dos soluciones separadas por una membrana semipermeable tienen la misma presión osmótica efectiva, son isotónicas; es decir, no fluirá agua entre ellas porque no hay ninguna diferencia de presión osmótica efectiva a través de la membrana. Cuando dos soluciones tienen diferentes presiones osmóticas efectivas, la solución con la menor presión osmótica efectiva es hipotónica y la solución con la mayor presión osmótica efectiva es hipertónica. El agua fluirá de la solución hipotónica a la solución hipertónica. Isotonicidad vs isosmolalidad Si dos soluciones tienen la misma osmolaridad calculada,se llaman isosmóticas. Si dos soluciones tienen diferentes osmolaridades calculadas, la solución con la osmolaridad más alta se llama hiperosmótica y la solución con la osmolaridad más baja, hiposmótica. Si dos soluciones tienen la misma osmolaridad calculada,se llaman isosmóticas. Si dos soluciones tienen diferentes osmolaridades calculadas, la solución con la osmolaridad más alta se llama hiperosmótica y la solución con la osmolaridad más baja, hiposmótica.

41 Tonicidad: presión osmótica efectiva de la solución. La tonicidad de una solución depende del efecto de la solución sobre el volumen de una célula. Una solución isotónica es aquella en la que pueden suspenderse las células del organismo sin que se produzcan cambios del volumen celular Una solución hipotónica es aquella en la que al suspenderse las células del organismo, estas se hinchan ( y pueden romperse) debido a la entrada de agua. Una solución hipertónica es aquella en la que al suspenderse las células del organismo, estas se encogen debido a la salida de agua.

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44 Cual es el valor de la osmolalidad de los líquidos corporales

45 El endotelio capilar y las membranas celulares son permeables al agua, permitiendo que plasma, líquido intersticial y LIC sean isosmóticos. La osmolaridad del plasma es 1 mOsm/l >; esto se debe a la contribución de proteínas plasmáticas que mantienen 20 mmHg más de presión en los La acción de la bomba Na-K impide que la osmolalidad del LIC sobrepase al liq intersticial Lo que determina la distribución del agua entre los compartimientos es el número de partículas osmóticamente activas 282 mosm/KgH2O 290 mosm/KgH2O Osmolalidad plasmática aproxim. 300 mOsm/Kg H 2 O 281 mosm/KgH2O

46 Cálculo de la osmolalidad plasmática Osmolalidad= contribución de los electrolitos + contrib glucosa + contrib urea Osmolalidad = 2. Na (mmol/l )+ glu (mg/dl) + urea (mg/dl) 18 6 10 Osmolalidad ~ 2. Na (mmol/l ) Errores:  subestimación por excluir otros cationes como K, Ca Mg  sobreestimación porque el Na solo se disocia 1,75  sobreestimación porque el Na no solo está unido a Cl sino a aniones polivalentes como SO 4, HPO 4  subestimación al medirse en mmol/l de volumen plasmático en vez de agua plasmática

47 hemólisis

48 Equipos para medir sodio y osmolalidad en sangre

49 Efecto de la adición de solución salina al líquido extracelular La Osmolalidad del LEC no cambia y no hay osmosis. Aum el vol del LEC La Osmolalidad del LEC aumenta. Hay osmosis al LEC. Aum el vol del LEC. Dism el vol del LIC y aumenta las osmol del LIC La Osm del LEC dism.El agua difunde al LIC Dism la Osmol del LIC.Los vol del LIC y LEC aum

50 Variaciones de los líquidos extracelular e intracelular Exceso de diurétios ↓ Na↓Vex ↑Vin Sudoración excesiva ↑Na↓Vext↓Vint

51 Bibliografía West :Bases fisiológicas de la práctica médica- 11ed Guyton: Tratado de fisiología médica-12ed Constanzo: Fisiología – 5 ed