ARTICULO CIENTIFICO BASADO EN LA ITAMORREAL LUIS ANGEL VALENCIA ANGELICA ESCORCIA YOEL ALMANZA JHON DONADO ERIKA OLIVEROS GRUPO 2 ALCALOIDES UNIVERSIDAD.

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1 ARTICULO CIENTIFICO BASADO EN LA ITAMORREAL LUIS ANGEL VALENCIA ANGELICA ESCORCIA YOEL ALMANZA JHON DONADO ERIKA OLIVEROS GRUPO 2 ALCALOIDES UNIVERSIDAD DEL ATLANTICO QUIMICA Y FARMACIA 17 DE AGOSTO DEL 2016 2016-2

2 ACTIVIDAD ANTIBACTERIAL DE Pedilanthus tithYmaloides (L.) Poit (ULTIMORRIAL)

3 CATALINO DE LA ROSA TORRES Químico farmacéutico, Ms.C Profesor Titular Universidad del Atlántico cdelarosa@uniatlantico.e du.co catalinod@yahoo.com 1 Grupo de Investigación Fitoquímica (GIFUS), Departamento de Biología. Facultad de Educación y Ciencias. Universidad de Sucre. Colombia. Correo Electrónico 2 Grupo de Investigación Fitoquímica (GIF), Departamento de Química. Facultad de Ciencias. Universidad del Atlántico. Colombia. Correo Electrónico RITA LUZ MARQUEZ VIZCAINO Químico farmacéutico, Ms.C Profesora Asistente Universidad de Sucre. fitorita@yahoo.es ANGELINA MERCADO PÉREZ Universidad de Sucre, Departamento de Biología. Facultad de Educación y Ciencias, Sincelejo –Colombia AUTORES: Ciudad: Sucre. País: Colombia. Fecha de publicacion: Mayo, 2007. Revista: Scientia Et Technica

4 INTRODUCCIÓN El empleo de plantas medicinales y productos derivados de las mismas esta aumentando de manera importante. La actividad antimicrobiana de estos productos naturales y extractos vegetales revela el potencial de las plantas como fuente de agentes antifúngicos lo cual le ha dado un uso científico a las especies vegetales medicinales. La mayoría de la población de los países en desarrollo utiliza plantas medicinales para sus necesidades primarias de salud. En especial los países tercermundistas quienes son los primeros en la obtención de productos naturales asequibles para toda la población. La familia Euphorbiaceae posee una amplia gama de aplicaciones alimenticias, venenosas, medicinales, industriales etc. Los principales metabolitos detectados han sido los terpenos, seguidos de los flavonoides y alcaloides.

5 OBJETIVO GENERAL Determinar la actividad actibacterial de la itomorreal en bacterias gram (+), gram (–) e identificar los metabolitos secundarios presentes en el extracto vegetales.

6 METODOLOGÍA  Recolección y tratamiento del material vegetal. La recolección del material se realizó en corozal (Sucre), un ejemplar que se encuentra en el herbario nacional de colombia con el numero COL 480935.  Extracción por percolación. Erlenmeyer 2000ml Hojas frescas (700g) Etanol al 98% Filtración durante 10 días. El extracto etanólico obtenido fue concentrado en una rota evaporador a presión reducida y secado al vacío sin calor.

7  Identificación cualitativa de metabolitos secundarios. 30ml Extracto etanólico sin concentrar. (E.E) E.E 10ml Solución de Pb(C 2 H 3 O 2 ) 2 al 4% con A. Acético al 0,5%. 1  Reconocimiento de flavonoides y leucoantocianinas 20ml E.E fraccionó Con CH 2 Cl 2 y H 2 O F. Acuosa F. orgánica 2  Reconocimiento de saponinas, terpenos, esteroides, quinonas, lactonas, taninos y antocianinas. 20g de hoja fresca picada. HCl al 2%. 3 ∆ Calentar 5min.  Reconocimiento de alcaloides.

8 4 Extracto etanólico concentrado Fraccionamiento Liquido. Con CH 2 Cl 2 y posteriormente con acetato de etilo en un embudo de separación 20 ml de extracto con 10ml del solvente. Este procedimiento se repitió hasta el agotamiento del extracto monitoreado en cromatografía a en capa delgada y revelando vainillina/H 2 SO 4.  Evaluación de actividad antibacteriana. Se determinó la actividad antibacterial del extracto etanólico total seco y fracciones de diclorometano y acetato de etilo utilizando las cepas de microrganismos Gram+, staphylococcus aureus y Bacillus cereus y Gram- Escherichia coli y Pseudomonas aeruginnosa, mediante el método de difusión en agar:

9 Cajas de Petri con agar Muller- Hinton solidificado. Perforación realizada con un sacabocados. (6mm diámetro ) Sellado posteriormente adicionando agar con una pipeta. Siembra de 2 bacterias Gram+ Siembra de 2 bacterias Gram- 50mg/ml de Extracto etanólico. 50mg/ml de extracto etanólico. Se repitió el ensayo para las fracciones de CH 2 Cl 2, acetato de etilo; Se uso cloramfenicol como control positivo y dimetilsulfoxido como control negativo. Las placas se incubaron por 24 horas a 37ºC y se observó en cual de ellas había inhibición del crecimiento.

10  Medio de cultivo.  Controles. Se uso cloramfenicol (10, 25, 30, 40, 50 mg/ml) como control positivo y dimetilsulfoxido como control negativo.  Preparación del inoculo. Se uso el agar Muller-Hinton, debido a que en este medio crecen bien la mayor parte de las bacterias. 20ml por placa. Luego de solidificado se realizaron 5 perforaciones por caja con ayuda de un sacabocados. Con un asa bacteriológica se tomaron 5 colonias. Se inocularon en 5ml de caldo nutritivo. Se ajusto el inoculo a una turbidez de 0,5 de la escala de Macfarland, incubándose a 35ºC durante 8 horas. Placa de cultivo en crecimiento activo.

11 Inoculación de las cajas. Luego de 8 horas, se sumergió un hisopo de algodón estéril en la suspensión para eliminar el exceso de caldo. Suspensión de bacterias estandarizada. Para la inoculación de las cajas se deslizo el hisopo por la superficie del agar tres veces hasta conseguir una siembra uniforme. Se dejaron secar las cajas durante 5min. Las placas se incubaron a 35ºC durante 24 horas y después se realizaron las lecturas en milímetros del diámetro del halo de inhibición de crecimiento de cada una de las cepas bacterianas.

12  Análisis estadístico. Los resultados del ensayo de actividad antibacteriana fueron avaluados mediante una prueba descriptiva por grafico y análisis de varianza. El análisis estadístico fue aplicado utilizando las cuatro repeticiones que se efectuaron por triplicado.

13 RESULTADOS Y DISCUSIÓN.  Ensayos de caracterización cualitativa del extracto etanólico de las hojas frescas de P. tithymaloides Alcaloides, flavonoides, antocianinas, ternos y lactonas. (reportados dentro de la fitoquímica de la familia Euphorbiaceae). Presencia  Evaluación de la actividad antibacteriana. Bacterias S. aereus, B. cereus, y P. aeruginosa. Inhibición de crecimiento En el extracto de EtOH y la fracción AcOEt, siendo estos los microrganismos y extractos seleccionados para el ensayo de difusión de agar.

14 Tabla 1. promedio del halo de inhibición (mm) y % de inhibición de las cepas bacterianas con el EXTRACTO TOTAL. Tabla 2. promedio del halo de inhibición (mm) y % de inhibición de las cepas bacterianas con FRACCION ACETTO DE ETILO F 2.

15 El extracto etOH (figura 1) produjo mayor halo de inhibición en la bacteria P. Aeruginosa (20mm) y la fracción AcOEt, presento mayor halo de inhibición en la concentración 50mg/ml en totas las bacterias evaluadas (26,62mm)

16  Análisis de varianza Indica Diferencias entre las variables (bacterias, concentraciones y extractos) La acción de los extractos varia con respecto a la concentración y bacterias ensayadas Mayor efecto inhibitorio la fracción AcOEt y la bacteria P. aeuruginosa (la mas inhibida con ambos extractos)  El potencial de p. Tithymaloides como antibacteriano no ha sido establecido anteriormente Resultados coinciden Actividad antibacteriana de la especie del genero Croton (euphorbiaceae) en un 76% para Gram+

17  Actividad antibacteriana Resultados Gram+ Gram- (P. aeruginosa) Bacteria menos sensible a los metabolitos secundarios de extractos vegetales. Resultados en P. tithymaloides demuestran lo contario. Continuidad de estudios debido multiresintencia de esta bacteria.  Actividades antibacterianas Relacionadas. Metabolitos secundarios (terpenos, alcaloides y flavonoides) Desconocido el elemento por el cual estas sustancias ejercen actividad antibacteriana Estudios para indicar compuestos responsables

18 Fracción diclorometno. NO inhibió  Crecimiento de bacterias Gram- y Gram+ evaluadas. Extracto etanólico total y fracción acetato de etilo. Actividad antibacteriana Bacterias S. aereus, B. cereus, y P. aeruginosa a las concentraciones ensayadas.