IDENTIFICACIÓN GENÉTICA Y MORFOLÓGICA DE OLIVOS CENTENARIOS ACTUALMENTE EN PRODUCCIÓN EN EL URUGUAY En Uruguay el auge del cultivo del olivo (Olea europeae.

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1 IDENTIFICACIÓN GENÉTICA Y MORFOLÓGICA DE OLIVOS CENTENARIOS ACTUALMENTE EN PRODUCCIÓN EN EL URUGUAY En Uruguay el auge del cultivo del olivo (Olea europeae L) genera la necesidad de caracterizar las variedades implantadas históricamente en el país. Los montes centenarios constituyen un excelente punto de partida, pues se encuentran en producción a pesar de no haber sido manejados durante décadas y por lo tanto están localmente adaptados. Gándara, J 1 ; Silveira, V 1.; López, S. 1 ; Pereira, J. 1 ; Pagliano, G. 1 ; Peverelli, J. 2 1 Dpto. Biología Vegetal, Facultad de Agronomía, Universidad de la República, Montevideo-Uruguay. 2 Semillas Santa Rosa S.A., Santa Rosa, Canelones-Uruguay. jgandara@fagro.edu.uy INTRODUCCIÓN MATERIALES Y MÉTODOS Se colectaron 40 muestras/árbol de hoja y fruto de plantaciones centenarias en 11 sitios del sur, sureste y litoral del país. Los individuos se seleccionaron por productividad y estado fitosanitario. Se extrajo ADN genómico a partir de hojas frescas juveniles según protocolo de Ferreira & Grattapaglia (1996). Se utilizaron 10 primers de regiones microsatélites: UDO99-006, UDO99-007, UDO99-008, UDO99-009, UDO99-011, UDO99-014, UDO99-028, UDO99-031, UDO99-035 y UDO99-043 (Cipriani et al., 2002). Se tomó como estándar la variedad ‘Frantoio’ para c/uno de ellos. Se determinaron caracteres cualitativos de fruto (9 con 29 estados), endocarpo (11 con 29 estados) y hoja (2 con 13 estados). Se registraron peso de fruto y endocarpo y largo y ancho de lámina foliar en 8040 hojas adultas. Se aplicó protocolo propuesto por Barranco & Rallo (2004) para el Comité Oleícola Internacional. El procesamiento de frutos, extracción de pulpa y elección de descriptores de endocarpo se realizaron de acuerdo a Cavagnaro et al. (2004). Se corrieron los programas InfoStat 2004 (Córdoba, Arg) y Statistica versión 7.0 (Tulsa, OK, USA). Se realizaron estudios de conglomerados (distancia de Jaccard, UPGMA). Morfológicos Hoja: A partir del coeficiente largo/ancho se distinguieron variedades, incluyendo variabilidad para el estándar ‘Frantoio’. La información se obtuvo mediante el t-test for dependent samples (Fig. 6) y luego se constató a través del estudio de microsatélites. Fruto y Endocarpo: El análisis de los caracteres correspondientes mostró diferentes resultados y poder discriminante. Ambos tipos de atributos fueron variables dentro y entre sitios de colecta. No obstante, los 5 caracteres del endocarpo permitieron agrupar el material con mayor precisión en función de sitios de colecta (Fig.7 y 8). RESULTADOS Moleculares Nueve microsatélites (SSR) mostraron resultados acordes a los perfiles esperados para la variedad ‘Frantoio’, de acuerdo a Cipriani et al., (2002) (Fig. 1). Con los primers UDO99-028 y UDO99-006 se identificaron variedades a partir de estándares de cultivares certificados de reciente implantación en el país (Fig. 2 A y B). Mediante el primer UDO99-028 se observó variabilidad intrapoblacional (Fig. 3). Sin embargo, este cebador no fue suficiente para detectar polimorfismo en todas las poblaciones (Fig. 4). Además, analizando 2 muestras por localidad se observó variabilidad interpoblacional con el primer UDO99-014 (Fig. 5). CONCLUSIONES Se identificaron los cultivares ´Frantoio´, ´Arbequina´, ´ Leccino´, ´Manzanilla´, ´Pendolino´ y ´Taggiasca´. En vestigios de quintas centenarias de Montevideo predominó la variedad italiana ´Frantoio´. Posiblemente, las múltiples introducciones de material de propagación clonal (estacas) han generado la uniformidad observada en algunos sitios y evidencian la composición monovarietal de dichas plantaciones. El coeficiente largo/ancho de hoja resultó apropiado para distinguir variabilidad, lo que lo convierte en un parámetro muy útil para estudios preliminares. Los análisis de fruto y endocarpo diferenciaron muestras por sitio de colecta y variedad. El gran poder discriminante de los caracteres del endocarpo confirma su estado altamente conservado como carácter taxonómico. Es decir, se trata de atributos de alta heredabilidad poco modificados por condiciones ambientales. Objetivo Identificar ejemplares de valor agronómico mediante microsatélites (SSR) y descriptores morfológicos de hoja, fruto y endocarpo en sitios edafo-climáticos contrastantes. Fig. 4. Productos PCR con el primer UDO99-028 en población de Canelones. 700 500 400 300 200 150 100 75 50 Fig. 3. Productos PCR con el primer UDO99-028 en población de Montevideo Rural. 700 500 400 300 200 150 100 75 50 UDO99-006 UDO99-007 UDO99-008 UDO99-009 UDO99-011 UDO99-014 UDO99-028 UDO99-035 UDO99-043 700 500 400 300 200 150 100 75 50 25 Fig. 1. Productos de PCR de Var. ‘ Frantoio ’ con diferentes primers UDO99-006, 07, 08, 09, 011, 014, 028, 035, y 043). Perfil estándard. Estándar morfológico variedad ‘Frantoio’. Forma ápice Nº surcos fibrovasculares Forma base Tipo de superficie Posición del diámetro transversal máximo Fig. 8. Caracteres de mayor poder discriminante del endocarpo. Fig. 2 B. Perfil PCR con el primer UDO99-006. Variedades:1 y 2- Frantoio, 3 y 4-Taggiasca, 5 y 6-Leccino. 700 500 400 300 200 150 100 75 50 700 500 400 300 200 150 100 75 Fig. 2 A. Perfil PCR con el primer UDO99-028. Variedades: 1-Taggiasca, 2-Leccino, 3-Arbequina, 4- Manzanilla, 5-Pendolino. Taggiasca Leccino Arbequina Manzanilla Pendolino Frantoio Taggiasca Leccino Fig. 5. Productos PCR con primer UDO99-014 en 4 sitios de colecta del sur y sureste del país. 300 200 150 100 75 50 Sitio 1 Sitio 2 Sitio 3 Sitio 4 MUESTRAS EN PROCESAMIENTO TAGGIASCA MANZANILLA ARBEQUINA PENDOLINO LECCINO FRANTOIO PENDOLINO -0.01 0.09 0.19 0.29 0.39 0.49 0.59 0.69 Distancia de Jaccard Fig. 7. Estudios de conglomerados ( UPGMA) para los 5 caracteres de endocarpo. Fig. 6. Coeficiente largo/ancho foliar para 11 sitios de colecta y 6 variedades patrón certificadas. Variedades certificadas de referencia Frantoio BIBLIOGRAFÍA BARRANCO, D. Y L. RALLO. 2004. El Cultivo del Olivo. Mundi Prensa-Junta de Andalucía. 800 pp. España. Pp.107-111. CIPRIANI, G; MARRAZZO, M.T; MARCONI, R; CIMATO, A. & R. TESTOLIN. 2002. Isolation and characterization of microsattellite in olive (Olea europeae L). Theor Appl Genet 104:223–228. FERREIRA, M.E. & D. GRATTAPAGLIA. 1996. EMBRAPA-CENARGEN, 2da. Ed. pp. 220. CAVAGNARO, P.; BAUZÁ, M.; JUÁREZ, J.; MASUELLI, W. 2004. Discriminación de variedades de olivo a través caracteres morfológicos y de marcadores moleculares. AgriScientia. http://crean.org.ar/agriscientia/volumenes/resumen/volumen.pdfhttp://crean.org.ar/agriscientia/volumenes/resumen/volumen.pdf CONSEJO OLEÍCOLA INTERNACIONAL. 1997. Metodología de caracterización primaria y secundaria. In: proyecto sobre conservación, caracterización, recolección y utilización de los recursos genéticos del olivo (RESGEN-CT 96/97). On line: http//: www.internationaloliveoil.org/resgen/esp/rg-metodosecun-es.html www.internationaloliveoil.org/resgen/esp/rg-metodosecun-es.html