MODULO AYUDAS DIAGNOSTICAS LABORATORIO CLINICO DOCENTE ADRIANA TORRES RANGEL BACTERIOLOGA ESP. GERENCIA DE LA CALIDAD Y AUDITORIA EN SALUD LABORANDO HOSPITAL LOCAL DEL NORTE SECRETARIA DE SALUD DEPARTAMENTAL

DESARROLLO DE LA CLASE 1. PRESENTACION DEL TEMA TUBERCULOSIS Y LEPRA 2. MONTAJE DE BACILOSCOPIA - COLORACION ZN 3. ACTIVIDAD LUDICA

TUBERCULOSIS Y BACILOSCOPIA

GLOSARIO Tuberculosis: enfermedad infecto-contagiosa bacteriana producida por las micobacterias del complejo tuberculosis, con diversas manifestaciones clínicas. Baciloscopia: búsqueda microscópica mediante la coloración de Ziehl Neelsen de bacilos ácido-alcohol resistentes en cualquier espécimen clínico. Bacilos Ácido Alcohol Resistentes (BAAR): bacilos que contienen en su pared celular ácidos micólicos, péptidos y glicolípidos capaces de retener la fucsina, posterior a la decoloración con alcohol ácido. Microorganismos ácido alcohol sensibles: que se colorea con el azul de metileno, durante la coloración de ZN.

GLOSARIO Coloración de Ziehl Neelsen (ZN): coloración específica para bacilos ácido alcohol resistentes. Se realiza en 3 tiempos: tinción (fucsina), decoloración (alcohol-ácido) y contraste (azul de metileno). Mycobacterium tuberculosis: micobacteria perteneciente al Complejo Mycobacterium tuberculosis, causante de tuberculosis. Sintomático Respiratorio (SR): según el Programa Nacional de Control de Tuberculosis (PNCT), define: persona con tos y expectoración por más de quince días. Complejo Mycobacterium tuberculosis: está conformado por Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium africanum, Mycobacterium bovis, Mycobacterium microti, Mycobacterium caprae y Mycobacterium pinnipedii. Causante de tuberculosis.

TUBERCULOSIS OMS cada segundo se produce en el mundo una nueva infección por el bacilo de tuberculosis y que una tercera parte de la población mundial está actualmente infectada por el bacilo de tuberculosis. Afecta grupos de edad económicamente activa (15-50 años) principalmente en los países en desarrollo Se han identificado factores que influyen en la morbilidad por tuberculosis en el mundo como son; la pobreza, negligencia en el diagnóstico así como en el tratamiento y la pandemia de VIH/SIDA. Para el año 2011 Colombia reporto una incidencia de 25,4 casos por 100.000 habitantes.

TUBERCULOSIS Malestar Grave: meningitis tuberculosa La TB es una enfermedad infecciosa crónica causada por el complejo Mycobacterium tuberculosis, el cual puede afectar cualquier órgano o tejido, sin embargo, la forma más común de la enfermedad es la Pulmonar Principal Síntoma Tos con expectoración mucoide o mucopurulenta por más de 15 días, “Sintomático Respiratorio” Hemoptisis Fiebre Sudoración nocturna Tuberculosis extrapulmonar : Pleural, ganglionar Malestar Grave: meningitis tuberculosa Dolor torácico Astenia Anorexia Pérdida de peso

TUBERCULOSIS

TUBERCULOSIS

Clasificación de caso Condición de ingreso Nuevo Paciente que nunca recibió tratamiento - menos de cuatro semanas. Recaída Paciente tratado que ha sido declarado y es diagnosticado nuevamente con tuberculosis bacteriológicamente positiva (baciloscopia o cultivo). Fracaso Paciente con baciloscopia o cultivo inicial positivo que siguió positivo al cuarto mes o más de haber comenzado el tratamiento. En casos MDR se considera como fracaso al paciente con dos o más cultivos positivos tomados con por lo menos un mes de diferencia en los últimos 12 meses de tratamiento, o si uno o más de los tres cultivos tomados al final del tratamiento son positivos. Abandono Todo paciente que regresa al tratamiento después de haberlo interrumpido un mes o más sin indicación médica

Diagnóstico Bacteriológico de Tuberculosis y Micobacteriosis “BACILOSCOPIA” LA BACILOSCOPIA tiene varias utilidades: Diagnóstico: para la detección de todo sintomático respiratorio con una baciloscopia positiva de diagnóstico, debe ingresar al programa. Control de tratamiento: se debe realizar baciloscopia, al 2º- 4º- 6º mes o al término del tratamiento. Si la baciloscopia al 2°, mes de tratamiento, es positiva (sospecha de fracaso) se debe realizar cultivo, si es positivo se realiza identificación y pruebas de sensibilidad de Mycobacterium tuberculosisa los fármacos antituberculosos. Si la baciloscopia al 4°, 6° mes ó al termino del tratamiento, es positivas (fracaso) se debe realizar cultivo, si es positivo se realiza identificación y pruebas de sensibilidad de Mycobacterium tuberculosisa los fármacos antituberculosos. Investigación epidemiológica: se realiza baciloscopia y cultivo a las personas SR que sean contactos de pacientes con tuberculosis.

BASILOSCOPIA Es la búsqueda microscópica mediante la coloración de Ziehl Neelsen (ZN) de Bacilos Ácido-Alcohol Resistentes (BAAR) en cualquier espécimen clínico

DEFINICION OPERATIVA DEL CASO TUBERCULOSIS PULMONARcaso Tuberculosis pulmonar Sospechoso Persona que presenta “tos con expectoración mucoide o mucopurulenta por más de 15 días de evolución Confirmado por laboratorio Caso con baciloscopia positiva para bacilos ácido alcohol resistentes (BAAR) o cultivo positivo para Mycobacterium tuberculosis Confirmado clínicamente Caso sospechoso con baciloscopia y cultivo negativo, que cumple con criterio clínico, radiológico y/o prueba de tuberculina positiva. Confirmado por nexo epidemiológico Caso sospechoso con criterio bacteriológico negativo que presenta criterios clínico y epidemiológico positivos.

LINEAMIENTOS DE BIOSEGURIDAD PARA EL PERSONAL Todo el personal en el momento deberá ser claramente instruido acerca de cómo se transmite la enfermedad y de las medidas de bioseguridad que deberá aplicar en su trabajo cotidiano. Cuando el personal del laboratorio presente sintomatología respiratoria (tos y expectoración por más de quince días), se le debe practicar baciloscopia seriada y cultivo. Los trabajadores en estado de inmunocompromiso, o con alteración en piel evitar todo contacto directo con pacientes, muestras, desinfectantes y material contaminado hasta que haya sanado completamente. En el laboratorio no se deben usar joyas durante el trabajo ya que constituyen peligro porque se pueden contaminar y transportar los microorganismos.

LINEAMIENTOS DE BIOSEGURIDAD PARA EL PERSONAL Lave las manos antes y después de manipular material biológico ya seaconsiderado infeccioso o no. Use ayudas mecánicas como: dispensadores, bombas o pipetas automáticas, ayudadores mecánicos. No pipetee con la boca Evite ingresar al laboratorio teléfono celular, libros, cuadernos o periódicos, que son considerados elementos transportadores de patógenos. No consuma alimentos, ni fumar, almacenar comestibles y aplicarse cosméticos dentro del laboratorio. Tenga cuidado de no llevar las manos a la boca, nariz, ojos, cara y cabello con el fin de evitar autoinoculación.

Coloración de Ziehl Neelsen La coloración se realiza en tres tiempos: tinción, decoloración y tinción de contraste Reactivos de la coloración de ZN: Fucsina fenicada Alcohol ácido al 3% Azul de metileno Número de portaobjetos con extendidos para colorear: máximo seis

FUNDAMENTO El mecanismo de la ácido alcohol resistencia, es una propiedad que tienen las micobacterias de captar en su pared la fucsina fenicada y retenerla aún con la acción del alcohol ácido, esta característica se debe al alto contenido de lípidos, péptidos, glicolípidos y particularmente ácidos micólicos presentes en la pared celular. El papel del mordiente (solución fenolada) es definitivo porque fomenta la penetración de la fucsina y su unión con los lípidos bacilares, haciéndola más liposoluble y menos hidrosoluble.

LABORATORIO VRS TB No rechazar ningún paciente con orden medica y factura para BK seriado o cultivo Registrar libro de BK, datos completos del paciente de manera clara y sin enmendaduras Procesar y reportar de manera oportuna y rápida Si solicitan cultivo – protocolo - orden medica –documentos Enviar segundas muestras para cultivar y controles positivos DATO POSITIVO inmediatamente reportarlo por correos correspondientes, jefe del centro de salud que pertenece y vigilancia epidemiológica Actualizar libro de BK - CULTIVOS

TECNICA TINCIÓN: FUCSINA FENICADA Cubra la totalidad del extendido con fucsina fenicada, previamente filtrada. Flamee suavemente con la llama de un mechero, pasándolo por debajo de los portaobjetos, hasta que se observe emisión de vapores, retire la llama y cuando éstos desaparezcan, flamee nuevamente hasta completar 10 minutos, evitando que hierva la fucsina, debido a que la pared de los bacilos puede destruirse. Deje enfriar y lave con agua destilada suavemente y elimine el exceso de agua para evitar diluir el próximo reactivo a adicionar

Decoloración: alcohol - ácido al 3% Cubra el extendido teñido con alcohol-ácido al 3% durante 1 minuto y lave suavemente con agua y limpie la parte posterior del portaobjeto. Si el extendido conserva el color rojo o rosado, vuelva a decolorar, las veces necesarias, con alcohol-ácido, lave con agua destilada y elimine el exceso de agua para evitar diluir el próximo reactivo a adicionar. Limpie la parte posterior del portaobjeto.

Colorante de contraste: azul de metileno Cubra el extendido ya decolorado, con azul de metileno durante 2 minutos. Lave suavemente con agua destilada. Limpie la parte posterior del portaobjeto para retirar residuos de colorante que puedan interferir con la lectura. Deje secar a temperatura ambiente en posición vertical

RESULTADO DE LA COLORACION CONTROL POSITIVO: VACUNA BCG CONTROL NEGATIVO: Microorganismos ácido- alcohol sensibles. Yogurth

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BIBLIOGRAFIA Diagnóstico bacteriológico de tuberculosis y micobacteriosis, República de Colombia, Instituto Nacional de Salud, Subdirección Red Nacional de Laboratorios Instituto Nacional de Salud Protocolo de Vigilancia en Salud Pública TUBERCULOSIS, Instituto Nacional de Salud, Ministerio de salud