II.- LAS TECNOLOGÍAS DEL ADN RECOMBINANTE Y LA INGENIERÍA GENÉTICA Concepto de ingeniería genética y ADN recombinante Técnicas de ingeniería genética: 1.- Obtención de fragmentos de ADN 2.- Inserción de fragmentos en vectores de clonación 3. - Clonación del ADN insertado Secuenciación Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

Conceptos Se llama ingeniería genética a una serie de técnicas que dan lugar a la formación de nuevas combinaciones genéticas, por medio de la inserción de un ADN de interés en un vehículo genético (vector), de modo que tras su introducción en un organismo huésped, el ADN híbrido se pueda multiplicar (clonar), propagar, y eventualmente expresarse. El ADN híbrido formado se denomina ADN recombinante.

1.-Obtención de fragmentos de ADN Técnicas de ingeniería genética 1.-Obtención de fragmentos de ADN Se realiza con enzimas de restricción. Son enzimas obtenidas de bacterias que son capaces de cortar el ADN en secuencias específicas La mayoría cortan secuencias de ADN dejando extremos cohesivos                                .                                                                                                                                                   

2.- Inserción de fragmentos de ADN Esta inserción se realiza en vectores de clonado, que son los agentes transportadores capaces de introducirlos en las células hospedadoras. Se utilizan con frecuencia dos tipos de vectores de clonación: plásmidos y virus..

3.-Clonación del ADN insertado El siguiente paso será introducir el vector de clonación, que contiene el gen que se quiere clonar, en la célula hospedadora para que ésta, al multiplicarse, origine un clon celular que lleve el gen concreto. Se llama genoteca de ADN a la colección de clones obtenidos a partir de un ADN de interés

Secuenciación Es la determinación de la secuencia de nucleótidos de un ADN Se pueden clonar muchos fragmentos de una molécula de ADN de diversos tamaños, secuenciarlos y luego recomponer la molécula original como si se tratase de un puzzle. Así se han secuenciado genes y genomas completos desde virus hasta el genoma humano.

Reacción en cadena de polimerasa (PCR) La potencialidad de esta técnica es impresionante, a partir de una sola molécula de ADN, la PCR puede generar 100000 millones de moléculas idénticas en una tarde. El ADN puede proceder de una muestra de tejido de un hospital, de una gota de sangre o semen en la escena de un delito, o de un cerebro momificado. La reacción es muy sencilla Se puede partir de cantidades de ADN muy pequeñas y sólo se precisa un tubo de ensayo, algunos reactivos, una fuente de calor y unas pequeñas cadena de nucleótidos que actúan como cebadores.

Aplicaciones de la PCR Estudios evolutivos Huellas dactilares del ADN Mediante la PCR se pueden amplificar genes de organismos ya extinguidos, como del mamut, o restos antiguos humanos. Se pueden comparar estos genes con los genes semejantes de organismos actuales y poder reconstruir árboles filogenéticos. La PCR también se ha utilizado para conseguir el mapa del genoma humano. Huellas dactilares del ADN Mediante esta técnica es posible comparar muestras diferentes de ADN para comprobar si pertenecen al mismo individuo o no, o si existe parentesco entre ellas. Esta técnica se aplica actualmente en Medicina forense e investigaciones policiales, con el fin de identificar individuos a partir de muestras biológicas, como sangre, semen, piel o cabellos. También se utiliza en las pruebas de paternidad. En Medicina para el diagnóstico de enfermedades

Huella genética En1985, un genetista británico , ALEC JEFFREY, descubrió un método para distinguir con facilidad unos individuos de otros a través de su huella dactilar de ADN. Se basa en el hecho de que existen fragmentos cortos de ADN que se repiten a lo largo del genoma, una y otra vez, y dicho número de repeticiones varía de una persona a otra. Estos fragmentos repetitivos son considerados ADN basura por no codificar proteínas. Jeffreys comprobó su descubrimiento comparando muestras de ADN entre individuos de la misma familia y observó que había tanta variabilidad de una a otra, que se podía determinar quien era quien.

La huella genética: Ciertas regiones del ADN se repiten El número de veces que se repiten difiere en cada individuo Tiene aplicaciones en investigaciones policiales, en identificaciones y parentescos, en compatibili-dades a la hora de un transplante, etc