Metabolismo del Eritrocito Fundatal 2006

Pérdida de ARN y mitocondrias Eritroblasto Pérdida del núcleo Reticulocito Pérdida de ARN y mitocondrias Eritrocito

Eritrocito Metabolismo reducido Ausencia de núcleo y ribosomas Ausencia de mitocondrias Ausencia de síntesis de proteínas Ausencia de Ciclo de Krebs No se produce renovación del stock de enzimas Glicólisis anaerobia Agotamiento progresivo de enzimas que limitan la sobrevida del GR

VIA EMBDEN-MEYERHOF Glucosa Vía Pentosas Síntesis GSH HK Glucosa 6P ATP ADP HK Mg Glucosa 6P GPI Fructosa 6P PFK Mg ATP ADP Fructosa 1-6P ALD TPI DHAP G3P NAD NADH G3PDH Pi Reducción Meta Hb 1,3DPG

Degradación Nucleótidos y Vías de rescate VIA EMBDEN MEYERHOF 1,3DPG pH (-) pH (+) DPGM DPGP ADP ATP Mg PGK Shunt Rapoport Luebering 2,3DPG 3PG Degradación Nucleótidos y Vías de rescate PGM 2PG ENOL PEP ADP ATP Mg PK LDH PIRUVATO LACTATO NAD NADH

Funciones del ciclo de EMP Producción de intermediarios de la glicólisis anaerobia 1. Inicia y mantiene la glicólisis 2. Síntesis de GSH 3. Activación de ribosa -5P (PRPP) 4. Mantenimiento de integridad y plasticidad de la membrana 5. Mantenimiento de bomba cationes ATPasa dep Modulación de la curva de disociación de oxiHb 1. Interviene en la reducción de piruvato a lactato 2. Reducción de MetaHb ATP 2,3 DPG NADH

CICLO DE LAS PENTOSAS Glucosa 6P-gluconato Glucosa 6P NADP NADPH 6P-gluconato Glucosa 6P G6PDH NADP 6PGDH NADPH Ribulosa 5P + CO2 Xilulosa 5P Ribosa 5P Fructosa 6P F6P + G3P Gliceraldehído 3P (…)

SÍNTESIS y REGENERACIÓN DE GLUTATIÓN Ácido glutámico Cisteína ATP g GCS ADP Glicina g glutamilcisteína Stress oxidativo ATP Glutatión Sintetasa ADP G6PD G6P NADP GSH H2O2 O2 SOD 6PG NADPH GSSG H2O Glutatión Reductasa Glutatión Peroxidasa

CAPACIDAD REDUCTORA Vía principal NAD Cit b5 Hb NADH Cit b5 red Meta Hb MetaHb R NADHdep 67% Vías accesorias NADP AM oxid Hb NADPH AM red Meta Hb MetaHb R NADPHdep 5% NADP GSH dehidroasc Hb NADPH GS-SG ascórbico MetaHb 16% GSH R NADP GSH Hb NADPH GS-SG MetaHb GSH R 12%

Hemicromos reversibles Hemicromos irreversibles Glucosa Glu H2O + ½ O2 Cys  GC Catalasa G6P Gly NADP+ 2 GSH H2O2 Hb Cb5+++ NADH NADPH Cb5++ NAD+ 6PG NADP+ AzMet NADPH NADPH GS=SG 2 H20 Hb AzMet NADP+ R5P PRPP G3P MetaHb - prevención - reducción Fe++ 6PGD G6PD HK GS=SG-R GSH-P (FAD) (Se) ox red F1-6DP F6P Fe+++ Hemicromos reversibles Hemicromos irreversibles Cuerpos de Heinz

VÍA DE RESCATE DE PURINAS ATP ATP-asa ADP AK Adenosina Quinasa APRT AMP Adenina ADP PPi ADENOSINA ATP PRPP UMP PPi P5’N CMP Pi IMP ADA H2O RPPK AMP Uridina NH3 Citidina ATP Hipoxantina Shunt HMP Inosina R-5-P Pi R-1,5-P2 PNP R-1-P PRM

ARN ribosomal ribonucleasa nucleótidos purínicos pirimidínicos AMP GMP UMP CMP P5´N Pi Uridina Citidina

Pruebas de laboratorio Anemias Hemolíticas Pruebas de laboratorio

ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de Laboratorio Objetivos: Destrucción acelerada de G. R. Eritropoyesis acelerada Diagnóstico diferencial

ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de Laboratorio Destrucción acelerada de Glóbulos Rojos Vida ½ eritrocitaria con 51Cr   Bilirrubina indirecta  LDH Signos de hemólisis intravascular 50 100 27 Días 10 % Actividad de 51Cr

ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de Laboratorio Signos de hemólisis intravascular  Haptoglobina y hemopexina  Hemoglobina libre en plasma Metahemalbuminemia Hemoglobinuria Hemosideruria  Estercobilinógeno y urobilinógeno Hb Hb libre MetaHb Hem Hb-hapto Dimerosαβ Globina + Hapto + Albúmina + Hemopexina Hemopexina-Hem MetahemaAlb

ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de Laboratorio Eritropoyesis acelerada SANGRE: Reticulocitosis Policromatofilia Macrocitosis Punteado basófilo Eritroblastos circulantes M.O.: Hiperplasia eritroide FERROCINÉTICA:  Turn over de Fe

ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de Laboratorio Diagnóstico diferencial Hemograma completo Examen del frotis de sangre periférica Recuento de reticulocitos Prueba de Coombs Electroforesis de Hb Resistencia osmótica globular Autohemólisis Test de Ham Test de isopropanol

Déficit de Piruvato Kinasa

Déficit de Piruvato Kinasa Test de Screening Autohemólisis: Fundamento: Hemólisis por anomalía intrínseca del GR al someterlo a incubación a 37ºC / 48 hs. con y sin agregado de glucosa y ATP Resultado: V.N: < 2.0% en ausencia de glucosa < 0.9% en presencia de glucosa Desventaja: Tiempo (laboratorista) No diagnóstico diferencial

Déficit de Piruvato Kinasa Test de Screening Técnica de Fluorescencia: PK PEP + ADP PIRUVATO + ATP LDH PIRUVATO + NADH + H+ LACTATO + NAD+ Fluoresce NO Fluoresce

Déficit de Piruvato Kinasa Test Diagnósticos: Dosaje cuantitativo de la actividad enzimática de PK Desventajas: Existencia de variantes cinéticas con  afinidad por el sustrato (System Low) Reticulocitosis Biología Molecular PK PEP + ADP PIRUVATO + ATP LDH PIRUVATO + NADH + H+ LACTATO + NAD+

Déficit de Glucosa-6-Fosfato-dehidrogenasa

Déficit de G6PDH Tests de Screening Test Brewer: Pasos: Hb (roja) + NO2Na  Hbi (marrón) Hbi + Azul Metileno + NADPH  Hb + NADP + leucobase Desventaja: No sirve para detección de heterocigotas

Hemicromos reversibles Hemicromos irreversibles Glucosa Glu H2O + ½ O2 Cys  GC Catalasa G6P Gly NADP+ 2 GSH H2O2 Hb Cb5+++ NADH NADPH Cb5++ NAD+ 6PG NADP+ AzMet NADPH NADPH GS=SG 2 H20 Hb AzMet NADP+ R5P PRPP G3P MetaHb - prevención - reducción Fe++ 6PGD G6PD HK GS=SG-R GSH-P (FAD) (Se) ox red F1-6DP F6P Fe+++ Hemicromos reversibles Hemicromos irreversibles Cuerpos de Heinz

Déficit de G6PDH Tests de Screening Test Citoquímico NO2Na HCN G6PDH Hb Hbi CNHbi (sol. con H2O2) NO2Na HCN G6PDH MTT Formazan insol.

Déficit de G6PDH Tests de Screening Electroforesis de isoenzimas de G6PDH B : normal A : normal africana A-: población afroamericana Mediterránea: población blanca

Déficit de G6PDH Tests diagnósticos: Dosaje cuantitativo de la actividad enzimática de G6PDH Biología Molecular G-6-PDH G6P + NADP+ 6PG + NADPH + H+ 6-PGDH 6PG + NADP+ Ribulosa-5-P + NADPH + H+ + CO2

Hora de despertarse… ¡Muchas Gracias!