parásitos intestinales Diagnóstico de parásitos intestinales Ricardo Ariel Floridia

¿Quiénes son los parásitos causantes de parasitosis intestinales? PROTOZOOS METAZOOS MASTIGÓFOROS NEMATELMINTOS PLATELMINTOS SARCODINOS CESTODOS CILIADOS TREMATODOS COCCIDIOS

¿Quiénes son los parásitos causantes de parasitosis intestinales? MASTIGÓFOROS SARCODINOS CILIADOS COCCIDIOS Giardia lamblia Entamoeba histolytica Balantidium coli Isospora belli Chilomastix mesnili Entamoeba coli Criptosporidium parvun Enteromonas hominis Endolimax nana Blastocystis hominis Dientamoeba frágilis Iodamoeba butschlii

¿Quiénes son los parásitos causantes de parasitosis intestinales? NEMATODES TREMATODES CESTODES Áscaris lumbricoides Fasciola hepática Taenia spp Trichuris trichiura Diphylobotrium latum Ancylostoma spp Hymenolepis spp Necator spp Diphylidium caninum Strongiloides spp Enterobius vermicularis

Epidemiología: Protozoos Cosmopolita Mecanismo de transmisión Directo: fecal oral Indirecto: aguas y alimentos contaminadas Forma infectiva: quiste Marcadores de las condiciones de higiene Infección en relación al inmuno-compromiso

Patología: Protozoos Localización: Intestinal Extra-intestinal Acción mecánica de adhesión al intestino Irritación de la mucosa intestinal Invasión - Infiltración Factores: Tiempo Carga Inmunidad Intrínseca

Sintomatología: Protozoos Asintomáticos Sintomáticos: Diarreas Meteorismo Dolor abdominal Deficiencia por malabsorción Nauseas Vómitos Pérdida de peso Deshidratación

Epidemiología: Metazoos Tasa de infección variable No tienen relación respecto al sexo Relación respecto a la edad Factores: Clima Condiciones socioeconómicas Contaminación fecal del suelo Costumbres

Patología: Metazoos Fenómenos inmunológicos. Toxialérgicos Obstrucción Acción expoliatriz Manifestaciones en piel, pulmones y hepática. Eosinofilia

Sintomatología: Metazoos Asintomáticos Sintomáticos Diarreas Vómitos Nauseas Dolores de tipo cólico Prurito Anemia Edema Pápulas Fiebre Pérdida de peso

Parásitos más relevantes en el diagnóstico Protozoos: Giardia lamblia Entamoeba histolytica Balantidium coli Coccidios (Isospora belli, Criptosporidium parvun, Blastocystis hominis) Metazoos: Todos los detallados anteriormente Todos los parásitos identificados deben informarse

Diagnóstico: Protozoos - Sintomatología Examen parasitológico de deposiciones: Directo y/o seriado Métodos serológicos Biopsias Giardia lamblia Quiste Chilomastix mesnili T: 10 a 15 um Q: 6 a 9 um Quiste

Entamoeba histolytica Enteromonas hominis Quiste T: 4 a 10 um Q: 6 a 8 um Dientamoeba fragilis Quiste ? T: 6 a 22um Entamoeba histolytica T: 20 a 30 um Q: 5 a 20 um Quiste

Entamoeba coli Quiste Endolimax nana Quiste Iodamoeba butchlii Quiste T: 20 a 40 um Q: 10 a 30 um Quiste Endolimax nana T: 6 a 12 um Q: 6 a 20 um Quiste Iodamoeba butchlii Quiste T: 9 a 13 um Q: 6 a 20 um

Isospora belli (20-33 μm por 10-19 μm ) Criptosporidium parvun Balantidium coli Quiste T: 50 a 200 um x 40 a 50 um Q: 40 a 60 um Isospora belli (20-33 μm por 10-19 μm ) Criptosporidium parvun Blastocystis hominis

Diagnóstico: Metazoos - Sintomatología Examen parasitológico de deposiciones seriado Necators spp. Ascaris lumbricoides Trichiuris trichiura Ancylostoma spp. Strongiloides spp

Enterobius vermicularis Fasciola hepática Enterobius vermicularis Diphylidium caninum Hymenolepis spp Taenia spp. Diphylobotrium latum

Práctico de laboratorio

Objetivos del trabajo práctico Reconocer los parásitos que puedan hallarse en intestino y que comprometen a nuestra población. Aplicar técnicas diferenciales diagnósticas para identificar protozoos y metazoos que parasitan intestino. Diferenciar los estadios morfológicos de parásitos intestinales. Relacionar la sintomatología clínica con parasitosis intestinales, mediante el estudio de casos

Uso de métodos de concentración Sobre la mesada encontrará un frasco rotulado como A Realizar los siguientes métodos de concentración: Método de Willis (Flotación) Método de Carles Barthelemy (Centrifugación) Método de Faust (Flotación - Centrifugación) 1 Evalúa mayor cantidad de muestra Mayor sensibilidad Mayor especificidad Bajo costo Mayor manipulación de la muestra Correcta elección del método Tiempo de realización Ventajas Desventajas

Fase previa en los métodos de concentración Homogeneización y Filtración FILTRADO

Método de Willis (Flotación) Solución NaCl (densidad 1,200) FILTRADO Homogeneizar Lugol 100x / 400x 30 a 45 min

Método de Carles Barthelemy (Centrifugación) Líq. B: Sol. de Ácido cítrico, formolada (Densidad: 1.047) Líq. A Sol. salina formolada Volcar sobrenadante 2 a 3 min 2000 rpm 2 a 3 cc Diluir Agitar Éter sulfúrico 1 min 1000 rpm Lugol Tirar  Sob. 100x / 400x

(Flotación - Centrifugación) Método de Faust (Flotación - Centrifugación) Solución de ZnSO4 Volcar sobrenadante H2O 2 a 3 cc Filtrado 2 a 3 min 2000 rpm Agitar Éter sulfúrico 1 min 1000 rpm Tirar  Diluir Sob. Lugol 100x / 400x

Método de Escobillado perianal (Para Enterobius vermicularis) 2 Sobre la mesada encontrará un frasco rotulado como B. Deberá realizar una técnica para evidenciar huevos de Enterobius vermicularis. Otra técnica es la del test de Graham, que se usa poco en la actualidad SOBRENADANTE B 5min. 2500 rpm - Gasas - Hisopos Lugol 100x / 400x

Observar al microscopio huevos y quistes de parásitos más frecuentemente encontrados 3 Sobre la mesada encontrará frascos rotulados con los nombres de los parásitos. Saque con pipeta Pasteur una gota y colóquela en portaobjeto, agregue una gota de lugol. Observe en 100x y 400x. Entamoeba coli Giardia lamblia Hymenolepis nana Taenia spp Áscaris lumbricoides

Observar distintos metazoos más frecuentes 4 Sobre la mesada encontrará frascos conteniendo parásitos helmintos. Identifíquelos, y escriba sus partes. Utilice la lupa para ver sus características Taenia spp Áscaris lumbricoides Fasciola hepática Enterobius vermicularis

Observar preparados coloreados 5 Se pueden realizar extendidos de los concentrados de materia fecal, que ayudará al diagnóstico de laboratorio. Las coloraciones mas utilizadas son: Giemsa, tricómica de Weber, Kinyoun, esta última muy útil para coccidios. Observar con objetivo de 100x los preparados, e identificar lo observado Giemsa Kinyoun Tricómica Giardia lambia Criptosporidium parvum Endolimax nana

Caso clínico

Nombre: A.G. Sexo: Masculino Edad: 4 años Origen: Zona rural de Salta Hermanos: 5 Padres: Trabajan en el campo Sintomatología: concurre al centro de salud por presentar fiebre, pérdida de peso, problemas para respirar. El cuadro comenzó hace 3 días. Debido a su estado el paciente queda internado. Se le realizan algunos análisis.

Análisis: Radiografía de tórax: infiltrado bilateral difuso compatible con neumonía. Hemograma: Eosinófilos altos, resto normal Hemoglobina baja, hematocrito bajo. Glucemia: normal. GOT: Normal. GTP alta. Albúmina baja. Resto normal. Orina y materia fecal: normal Evolución: el paciente recibe terapia para la sintomatología presentada (fiebre). Se le da corticoides porque se piensa que puede ser alergia estacional. El bajo peso se le atribuye a desnutrición, para la que se le instaura un tratamiento. Es dado de alta.

15 meses meses después… Vuelve a consultar 15 meses meses después… Vuelve a consultar. Sintomatología: presenta dolor tipo cólico, nauseas, vómitos, en ocasiones diarreas, anorexia, irritabilidad, falta de crecimiento, palidez. En la materia fecal la madre observo: Se compensó al paciente y se le solicitó un estudio parasitológico seriado para confirmar diagnóstico clínico. El bioquímico encontró lo siguiente:

A B C El bioquímico observa tres imágenes e informa al médico. El paciente es tratado con albedazol y es dado de alta. Evoluciona favorablemente revirtiendo toda su sintomatología. ¿Cuál fue su diagnóstico?

De los hallados ¿Quiénes son considerados estrictamente patógenos? Cuestionario. ¿Qué representan las imágenes halladas? Identifique c/u. De los hallados ¿Quiénes son considerados estrictamente patógenos? ¿Qué métodos de concentración podría haber usado el bioquímico para el análisis? ¿Qué parásito fue el responsable del cuadro clínico? Porque? ¿ Porque 15 meses antes no se observo nada en el análisis de materia fecal realizado? Relacione la sintomatología del cuadro clínico.

Bibliografía 1- Walzer PD et al., 1973: Balantidiasis outbreak in Truk. American Journal of Tropical Medicine and Hygiene, 22:33–41. 2- Contemporary pediatrics. Guía para el manejo de protozoarios entéricos emergentes 1995. J. Cowden, P. Hotez. (Facultad de Medicina de la Universidad de Yale, New Heaven; Departamento de Microbiología y Medicina Tropical, George Washington University Medical Center, Washington, DC, EE.UU.) 3- Libro de Parasitología clínica médica. Antonio Atías. ISBN: 9562201554. 1998. 4- Curry A, Smith HV, 1998 Emerging pathogens: Isospora, Cyclospora and microsporidia. Parasitology, 117:S143–159. 5- Dientamoebosis: ¿Una protozoosis intestinal olvidada? Bárbara Gomila1, Leticia Amselem1 y J. Guillermo Esteban2 Servicio de Microbiología1, Hospital General de Castellón, Castellón; Departamento de Parasitología2, Facultat de Farmàcia, Universitat de València, Valencia 6- Garcia LS, 1999: Flagellates and ciliates. Clinics in Laboratory Medicine, 19:621–638. 7- Anales de la Facultad de Medicina. Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Copyright© 1999 ISSN 1025 – 5583. Vol. 60, Nº2 – 1999. Colitis Balantidiásica: A Propósito de un Caso Fatal en el Departamento de Huancavelica. Wenceslao Vásquez1 y José Vidal2. 8- Ballal M et al., 1999: Cryptosporidium and Isospora belli diarrhoea in immunocompromised hosts. Indian Journal of Cancer, 36:38–42. 9- Bialek R et al., 2002: Comparison of autofluorescence and iodine staining for detection of Isospora belli in feces. American Journal of Tropical Medicine and Hygiene, 67:304–305. 10- Isosporosis o isosporiasis. Dra. Teresa Uribarren Berrueta. Departamento de Microbiología y Parasitología, Facultad de Medicina, UNAM. 11- Curso sobre Helmintiosis Dra. Leonora Kozubsky PROECO Cursos a Distancia por Internet Programa de Educación Continua Fundación Bioquímica Argentina. http://campus.fba.org.ar/ Modulos 1 al 5. 12- Guía de Trabajos Prácticos de Parasitología y Micología de la UNSL. Áño 2010 13- Atlas de Parasitología humana . 5ta Edisión Ash – Orihel. Editorial Panaericana. Año 2010 14- http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/HTML/Dientamoeba.htm