Electroforesis capilar
Ventajas de la electroforesis capilar Alta resolución (105 a 106 platos teóricos)-HPCE Requiere pequeño volumen de muestra (1-10 nl) Rápida separación (1 a 45 min.) Aplicable a todo tipo de sustancias Automatización Cuantificación (lineal) Reproducibilidad Puede acoplarse a espectrometría de masa Datos fundamentales
Esquema de equipo de CE
Tipos de moléculas que pueden ser separadas por CE Proteínas Péptidos Amino ácidos Ácidos nucleicos Iones inorgánicos Bases orgánicas Ácidos orgánicos
Condiciones de CE Se utilizan altos voltajes 10-30kV.(>500V/cm; 10-20 mA) Moléculas positivas, negativas o neutras puede separarse. La separación se realiza en un tubo capilar de sílica fundida cubierta con poliamida para darle flexibilidad. El tubo capilar tiene 30-100cm. De longitud y 25-100m de diámetro interno. Los grupos hidroxilos de la sílica se disocian dejando el tubo con una carga negativa.
Tubo capilar de sílica con grupos OH expuestos
Flujo electroendosmótico
Migración
Movilidad en CE m = v/E = Q/ 6prh
Criterio de separación Modalidad Criterio de separación Sustancias EC de zona (CZE) Densidad de carga Moléculas pequeñas, péptidos, proteínas, DNA pequeño. Electroenfoque pl Péptidos, proteínas. Cromatografía micelar electrocinética capilar (MECC) Densidad de carga y coeficiente de reparto en las micelas, según la hidrofobicidad Moléculas pequeñas, péptidos, DNA. EC en gel Desnaturalizante No desnaturalizante Masa molecular Tamaño y densidad de carga. Péptidos, proteínas, DNA
Surfactantes en MECC
Inyección de la muestra