Procedimiento de la huella genética de ADN

Tubos para cada grupo de trabajo Huella Genética de ADN

Tubos que contienen 10 µl de muestra de ADN 70 µl Mezcla de enzimas Sospechoso 1 – 5 Tubos que contienen 10 µl de muestra de ADN 70 µl Mezcla de enzimas 10 µl CS ADN 0,24 g de Agarosa 80 µl solución tampón 10 µl Marcador Huella Genética de ADN

1. Preparación de la restricción Huella Genética de ADN

¡Atención! Para cada pipeteo usa una punta de pipeta nueva para evitar contaminaciones. Por favor, recorta todos los tubos al menos durante 30 segundos para mezclarlos. Huella Genética de ADN

1. Tubos con muestras de ADN CS S 1 S 2 S 3 S 4 S 5 ADN 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl Huella Genética de ADN

1.1 Pipetea 10 µl de la mezcla de enzimas en cada tubo CS S 1 S 2 S 3 S 4 S 5 ADN 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl Mezcla 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl enzimas (ENZ) Huella Genética de ADN

2. Digestión de restricción Coloca los tubos en un bastidor flotante e incubarlos durante 30 min a 37 ºC en un baño de agua o en una estufa. Huella Genética de ADN

3. Preparar la electroforesis Huella Genética de ADN

3.1 Preparar la cámara de electroforesis Peine Varillas metálicas Cestilla Insertar la cestilla, las varillas de metal y el peine en la camara de electroforesis. Huella Genética de ADN

3.2 Fabricar el gel de Agarosa (0,8%) Introducir 0,24 g de agarosa + 30 mL TAE-tampón en un frasco Erlenmeyer de 250 mL. Calentar un poco el frasco Erlenmeyer en el microondas, removerlo y calentarlo otro poco. Huella Genética de ADN

3.3 Verter el gel Vierte el gel a 55 °C en la caja del gel Atención: Comprueba la temperatura con el dorso de la mano No mover el gel hasta que esté sólido. Huella Genética de ADN

3.4 Preparar la cámara Después de que el gel se haya solidificado, quita las varillas de metal de la cámara de electroforesis Llena la cámara con 270 ml de TAE-tampón para cubrir el gel. Tira el peine. Huella Genética de ADN

4. Preparación del marcador de ADN Pipetea 10 µl de la solución tampón (Loading Buffer) en 10 µl marcador de ADN (M). Huella Genética de ADN

5. Añadir 10 µl de solución tampón (Loading Buffer) Pipetea 10 µl de la solución tampón en el CS y S1- S5. 10 µl 10 µl 10 µl Huella Genética de ADN

¡Recuerda la secuencia! 6. Llenar los pocillos La línea izquierda permanece libre Pipetea 20 µl de cada muestra y 20 µl de marcador de ADN(M) en los pocillos ¡Recuerda la secuencia! Líneas: llena de izquierda a derecha Huella Genética de ADN

6. Llenar los pocillos Atención: las bolsas de gel no deben estar perforadas Huella Genética de ADN

7. Electroforesis (a 120 V ca. 30 min) Para la electroforesis cuando la banda azul haya migrado a 1 cm antes del final del gel. Huella Genética de ADN

8. Colorear el ADN Transfiere el gel en el bol del colorante y cúbrelo con 60 mL de la solución de la tinción durante 2 min. Coloca la solución de tinción en el frasco Erlenmeyer. Huella Genética de ADN

9. Analizar el gel ¿Cúal de los sospechosos es el culpable? CS S1 S2 S3 S4 S5 M 9. Analizar el gel ¿Cúal de los sospechosos es el culpable? Huella Genética de ADN

9. Resultado Huella Genética de ADN