IMPACTO DE LOS AGENTES DE BIOCONTROL SOBRE LAS COMUNIDADES MICROBIANAS Laura Gasoni Kazunari Yokoyama Nancy Kahn Guido Chiessa Viviana Barrera Kiroku Kobayashi

DE FITOPATÓGENOS DE SUELO CONTROL BIOLOGICO DE FITOPATÓGENOS DE SUELO SELECCIÓN DE ANTAGONISTAS FORMULACIONES INSTALACION EN EL SUELO REDUCCIÓN DE LA ACTIVIDAD PATOGÉNICA IMPACTO SOBRE LAS COMUNIDADES MICROBIANAS ORIGINALES

El Análisis tradicional de comunidades microbianas contempla: 1) Aislamiento de los microorganismos 2) Caracterización y/o identificación 3) Descripción de la comunidad basada en la diversidad de los aislamientos.

OTROS METODOS Inoculación directa de muestras de suelo en microplacas con 96 fuentes de Carbono. Obtención de perfiles multivariados de degradación, que se conocen como Community level Physiological Profile (CLPP), por la reacción colorimétrica que resulta de la utilización de las diferentes fuentes de carbono. Indicadores de la dinámica temporal, que permiten relacionar la fracción de la comunidad analizada con la comunidad total.

Soil Suspension Cell Suspension ANÁLISIS DE LAS COMUNIDADES MICROBIANAS Soil Suspension Consiste en la inoculación directa de una suspensión de suelo. Cell Suspension Consiste en el aislamiento de los organismos del suelo, su multiplicación e inoculación en microplacas.

COOPERACION ENTRE AMBOS GOBIERNOS CLPP Suspensión de suelo células CLPP

¿COMO SE VISUALIZA LA ACTIVIDAD? El indicador ubicado en el fondo de cada celda reacciona con el NADH producto de la respiración, se reduce y se observa el color violaceo (placas GN/GP) o rosado (FF). Placa GN/GP Placa FF

FUENTES DE CARBONO AGRUPADAS EN MICROPLACAS GN , GP y FF CARBOHIDRATOS AMINOACIDOS ACIDOS CARBOXILICOS ESTERES COMPUESTOS FOSFORILADOS AMIDAS POLIMEROS COMPUESTOS CON BROMO AMINAS ALCOHOLES COMPUESTOS AROMATICOS

Fuerzas de selección dentro de la placa Diferentes a las del suelo Incapacidad de ciertos microorganismos de crecer en un medio sólido pero si en medio liquido. Acción cooperativa entre microorganismos (tambien existe en el suelo). Antagonísmo entre organismos (tambien existe en el suelo). Toxicidad causada por el colorante reductor (poco probable).

INTERPRETACION DE LAS LECTURAS Lectura Positiva (+ / 1) Borderline (b / 0.5) Reacción lenta, inferior al umbral. Lectura Negativa (- / 0) Esto depende de la absorbancia de cada celda y del umbral de corrección automático del sistema (estrecha relación con la intensidad de color de las celdas). A simple vista muchas reacciones son imposibles de visualizar

Riqueza funcional Diversidad funcional Numero de celdas positivas al momento de la lectura Diversidad funcional No solo considera las lecturas positivas, sino también su distribución (Patron). Dos placas con el mismo numero de reacciones positivas (similar riqueza) pueden tener diferente diversidad funcional en funcion de las fuentes degradadas.

Fusariosis en TABACO (Fusarium Wilt) MONOCULTIVO El monocultivo puede favorecer la dominancia de una población patogénica.

ENSAYO SOBRE PARCELAS CON MONOCULTIVO DE TABACO Tratamientos: Trichoderma sp. (aislamiento R3P2) Control Inmersión de raíces de plántulas de tabaco al momento del transplante (formulados líquidos) Análisis de resultados

RESULTADOS OBTENIDOS BIPLOTS Análisis de Componentes Principales (ACP) Análisis de conglomerados Reduce la dimensionalidad (R96 a Rn<96) Agrupa por similitudes Índice de Biodiversidad DI= ( Si=1 n di) 2 / n BIPLOTS

BIPLOT Trichoderma Trichoderma Trichoderma + Control Variabilidad explicada: 84% (59% + 25%)

En el suelo tratado con Trichoderma sp En el suelo tratado con Trichoderma sp. se ve mayor dispersión (distancia) entre los puntos generados por los microorganismos que consumen preferentemente Compuestos Fosforilados. Esto podría estar asociado al estimulo de una flora bacteriana diferente (antagonistas de Fusarium sp??). Los cambios en la comunidad se ponen de manifiesto con un aumento del índice de biodiversidad (56865 vs 67608).

Trichoderma Trichoderma Trichoderma + Control La comunidad original se compone de microorganismos que degradan preferentemente Carbohidratos, Ac. Carboxílicos, Aminas, Amidas, Esteres y Polímeros. Luego del tratamiento con Trichoderma sp (círculos rojos) se estimulo la actividad de una microfloras que degrada compuestos fosforilados.

Los sustratos presentes en las placas se han seleccionados por su capacidad discriminante para establecer diferencias entre microorganismos y no porque sean los que usualmente se encuentran presentes en los ecosistemas. Es importante considerar que la observación indirecta de la comunidad puede ser tan útil como la directa para detectar cambios relativos.

MUCHAS GRACIAS