Genética General Laboratorio Universidad Nacional de San Martín Instituto de Investigaciones Biotecnológicas Genética General Laboratorio TP2: Mapeos mediante cruzamientos genéticamente controlados en Drosophila

TP 2: Mapeos mediante cruzamientos genéticamente controlados en Drosophila Objetivos 1 ) Mapeo genético entre los genes yellow y white basándose en la frecuencia relativa de recombinantes 2 ) Mapeo cromosómico del elemento P de líneas de una colección de mutantes insercionales basándose en la segregación de los marcadores de los balanceadores con respecto al marcador del P

Mapa genético - Ligamiento Establecer el orden y las distancias relativas entre genes ligados en un mismo cromosoma en base a la frecuencia de eventos de recombinación genética (crossing over). Crossing over: las cromátidas homólogas no hermanas intercambian material genético. la probabilidad de entrecruzamiento es proporcional a la distancia entre genes Unidad de distancia de mapa genético: unidad de mapa (um) ó centi Morgan (cM) 1 um equivale a 1% de recombinantes

Mapa genético de Drosophila Genes ligados en el cromos X: Alas cross-veinless (cv) Alas cortadas (ct) Ojos vermillion (v)

Determinar mapa genético entre: Alas cross-veinless (cv) Alas cortadas (ct) Ojos vermillion (v) Cruzamiento prueba calcular la frecuencia de recombinantes Parentales: hembras v + + x machos v cv ct + cv ct Y En Drosophila, el macho no recombina Progenie: v + + 580 + cv ct 592 v cv + 45 + + ct 40 v cv ct 89 + + + 94 v + ct 3 + cv + 5 % rec entre loci v-cv = ? % rec entre loci cv-ct = ? % rec entre loci v-ct = ?

Determinar mapa genético : % rec entre loci v-cv = 18,5% % rec entre loci cv-ct = 6,4% % rec entre loci v-ct = 13,2% cv ct v 6,4 um 13,2 um 18,5 um < 19,6 um No considera los dobles recombinantes subestimación

TP 2: Mapeos mediante cruzamientos genéticamente controlados en Drosophila Objetivos 1 ) Mapeo genético entre los genes yellow y white basándose en la frecuencia relativa de recombinantes 2 ) Mapeo cromosómico del elemento P de líneas de una colección de mutantes insercionales basándose en la segregación de los marcadores de los balanceadores con respecto al marcador del P

Parte I Mapeo genético entre los genes yellow y white en el cromosoma X de Drosophila Cruzamiento a realizar prueba ¿Cómo se obtuvieron las moscas heterocigotas? ¿Cuál es el fenotipo/genotipo esperado en la progenie? Contar número de individuos recombinantes Calcular la distancia genética entre los loci yellow y white

Mapeo genético entre los genes curly wing (Cy) y black body (b) en el cromosoma 2 de Drosophila Hembra x Macho

TP 2: Mapeos mediante cruzamientos genéticamente controlados en Drosophila Objetivos 1 ) Mapeo genético entre los genes yellow y white basándose en la frecuencia relativa de recombinantes 2 ) Mapeo cromosómico del elemento P de líneas de una colección de mutantes insercionales basándose en la segregación de los marcadores de los balanceadores con respecto al marcador del P

Mapeo del elemento P Mapear el sitio de inserción para identificar el gen afectado Sitio etiquetado por el elemento P Marcador w+ Secuencia del P 1) Determinar el cromosoma que contiene el elemento P 2) Determinar la posición genética relativa del elemento P dentro del cromosoma 3) Determinar la posición molecular del elemento P en el genoma

Parte II Mapeo cromosómico del elemento P de líneas de una colección de mutantes insercionales 891 964 Líneas de la colección de moscas 869 -Elemento P insertado: -Observar y anotar el color de ojos de cada línea

Cromosomas balanceadores - Contienen rearreglos cromosómicos No recombinan con el cromosoma homólogo - Contienen marcadores dominantes Seguimiento de los cromosomas en la progenie (tanto el balanceador como el cromosoma homólogo) Deducir fácilmente el genotipo de la progenie cuando la mutación de interés no presenta un fenotipo morfológica visible Etiquetas para cruzamientos genéticos controlados

Caso 1: -Balanceador en el cromosoma III marcado con Stubble (Sb) -Mutación puntual en el cromosoma 3 Parentales: Genotipo de la progenie: Fenotipo de la progenie: Seleccionar en contra de Sb para quedarse con las moscas que tiene la mutación de interés

Caso 2: -Balanceador en III marcado con Stubble (Sb) -Elemento P insertado en cromosoma II (marcador w+) -Elemento P insertado en cromosoma III (marcador w+) Parentales: Genotipo de la progenie: Fenotipo de la progenie: Seleccionar en contra de Sb para quedarse con las moscas que tienen el elemento P en el III

Caso 3: -Balanceador en III marcado con Stubble (Sb) -Mutación letal en homocigosis en el III Parentales: Parentales: Progenie: Progenie: Mantener líneas con mutaciones letales balanceadas La mutación letal se pierde con las generaciones

Parte II Mapeo cromosómico del elemento P de líneas de una colección de mutantes insercionales Líneas de la colección de moscas: 891, 964, 869 -Cruzamientos a realizar: En la progenie: Evaluar la segregación del P con marcador w+ con respecto a los marcadores de los cromosomas balanceadores II y III

Caso del elemento P (w+) en el cromosoma 2 Cromosoma 2: Balanceador marcado con Curly (Cy) Cromosoma 3: Balanceador marcado con Stubble (Sb) Cruzamiento a realizar Fenotipo de la progenie La segregación del elemento P está condicionada por el cromosoma balanceador del II, no es independiente de Cy (marcador del cromosoma homólogo)

Caso del elemento P(w+) en el cromosoma 3 Cromosoma 2: Balanceador marcado con Curly (Cy) Cromosoma 3: Balanceador marcado con Stubble (Sb) Cruzamiento a realizar Fenotipo de la progenie La segregación del elemento P está condicionada por el cromosoma balanceador del III, no es independiente de Sb (marcador del cromosoma homólogo)

Caso del elemento P(w+) en el cromosoma X Cromosoma 2: Balanceador marcado con Curly (Cy) Cromosoma 3: Balanceador marcado con Stubble (Sb) Cruzamiento a realizar Fenotipo de la progenie Hembras: Fenotipo diferencial entre macho y hembra Machos: El elemento P segrega ligado al cromosoma X

Caso del elemento P(w+) en el cromosoma 4 Cromosoma 2: Balanceador marcado con Curly (Cy) Cromosoma 3: Balanceador marcado con Stubble (Sb) Cruzamiento a realizar Fenotipo de la progenie Elemento P segrega de manera independiente con respecto a los marcadores de los cromosomas II y III y el cromosoma X

Mapeo genético entre los genes yellow y white Parte I: Mapeo genético entre los genes yellow y white F1) F2) Analizar en TP4 yw x yw ++ Y 14 días a 23ºC Parte II: Mapeo cromosómico del elemento P de líneas de una colección de mutantes insercionales F1) F2) Analizar en TP4 w x línea a mapear w w; Cy ; Sb; + 14 días a 23ºC