Alteraciones en JAK2, B2M y otros genes que contribuyen en la inmunovigilancia en cáncer de pulmón. Maria Saigí, Juan J Alburquerque-Béjar, Eva Pros, Octavio A. Romero, Carolina Pereira, Isabel Català, Elisabeth Brambilla, Ernest Nadal, Montse Sánchez-Céspedes.  

Disclosure Information Grants and research funding: - M. Saigí is supported by a Rio Hortega (CM17/00180) contract from the ISCIII. - O.A. Romero is supported by a Juan de la Cierva contract (IJCI-2016-28201) from the MINECO. - This work is supported by SAF2014-54571-R from the MINECO and a grant from the Fundacion Científica Asociacion Española Contra el Cancer-GCB14-2170, to M. Sánchez-Céspedes. Consulting fees: - E. Nadal has received consulting fees from BMS, MSD, Lilly, Pfizer, Roche, Astra Zeneca, Takeda,Boehringer-Ingelheim and Celgene. He has received research funding from Roche and Pfizer.

Adaptive PD-L1 upregulation upon IFN ϒ exposure Introducción Adaptive PD-L1 upregulation upon IFN ϒ exposure Cancer Discov 2017; 7(2); 128–30. Objetivo: identificar genes que contribuyen en la capacidad de inmunovigilancia en cancer de pulmón.

Material y métodos Material: 42 líneas celulares Métodos: 32 comerciales, ATCC 10 Líquidos pleurales Material: 42 líneas celulares Métodos: Next Generation Sequencing Western-blot (proteína) qPCR (mRNA) Inmunofluorescencia IFN-g 6h Basal conditions B2M/DAPI

Resultados Respuesta a interferón-g en líneas celulares (WB) LP-1 Basal IFN g b-Actin PD-L1 pSTAT1 STAT1 H1573 H1993 H2126 H596 (C+) Adapted from Saigi M et al. Clin Can Res 2018

Resultados Respuesta de PD-L1 a interferón-g en líneas celulares (qPCR) C+ JAK2 mutant C+ H596 H2126 H1573 H1993 LP-1 C+ interferon-g impaired interferon-g impaired mutant H596 H2126 H1573 H1993 LP-1 IFN-g signature: IRF-1, PD-L1, SOCS1, ICAM1, TAP1, PD-L2

Resultados NCI-H1993 NCI-H1573 NCI-H2126 p.Gly76Alafs*20 p.R426X Mutaciones en JAK2 con pérdida de función (Sanger Sequencing) NCI-H1993 NCI-H1573 NCI-H2126 E3 E7 JAK2 exon 10 JAK2 exon 12 p.Gly76Alafs*20 c.1276C>T c.1520 C>G p.R426X p.S507X E3 E4 Normal sequence JAK2 Normal sequence (NM_004972.3)

Resultados Localización de B2M/HLA-1 complex tras estimulación con interferon-g (IF) JAK2 mutant Candidate gene mutant DAPI / β2m Basal IFN g LP-1 DAPI / β2m H2126 H2126 H1993 LP-1 DAPI / β2m H1993 Basal IFN g

Resultados C+ C- (b2M mutant) H596 H2126 DAPI / β2m DAPI / β2m H2009 LP-2 H596 Ebc1 LP-2 Basal IFN g Basal IFN g

Conclusiones JAK2, B2M y otro gen involucrado en la vía del IFN-g, constituyen immuno-evasion drivers en cáncer de pulmón. La caracterización funcional de las alteraciones en estos genes es crucial para comprender los mecanismos que influyen en la inmunotolerancia. Una pérdida de función de estos genes constituye potenciales mecanismos de resistencia a los inhibidores de los immune checkpoints.

Proposed incidence of genetic alterations that modulate tumour immune surveillance Immune recognition Immune evasion IFNg response ~30% B2M,HLA-A (5%) TAP1, PDIA3 (3%) HLA-I complex IFNγ-pathway JAK2,JAK1 (5%) ~60% Other STK11* Unknown Normal levels of immune-response related proteins Low levels of immune-response Pro-immune response Pro-angiogenic MET* (<10%) COSMIC/CCLE databases Lung Cancer * Not mutually exclusive genetic alterations Saigi M et al. Clin Can Res 2018

Agradecimientos Todos los pacientes. Genes and Cancer group, PEBC-IDIBELL Montse Sánchez-Céspedes Juanjo Alburquerque Eva Pros Octavio Romero Paula Llabata Sergio Niñerola Isa Bartolessis Institut Català d’Oncologia, Barcelona Hôpital Universitaire Grenoble, France Ernest Nadal Isabel Català Elisabeth Brambilla Anne Mc Leer Florin