WORKSHOP EDUNABIO-ARGENTINA UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA FACULTAD DE AGRONOMIA WORKSHOP EDUNABIO-ARGENTINA Evaluación in vitro de hogos nativos antagonistas a Moniliophthora roreri (Cif. & Par., Evans et al), en el cultivo de cacao (Theobroma cacao L.) Autores: Mejía-Betancourt Francisca Alvarado-Rodríguez Rommel Asesores: Vega-Jarquín C Blandón-Díaz Ulises Marzo, 2017

OBJETIVO Generar información científica sobre la capacidad antagónica mostrada in vitro por hongos nativos contra Moniliophthora roreri agente causal de la Moniliasis del cacao.

En el 2015 las exportaciones alcanzaron 3,839.20 tm INTRODUCCIÓN IICO 2015 reconoce a Nicaragua como productor de cacao fino En el 2015 las exportaciones alcanzaron 3,839.20 tm CETREX (2016) 10,500 productores 11,017 ha sembradas 15.94 qq.ha-1 MEFCCA (2013) Fungicidas sintéticos con alto costo (Ramírez et al., 2011). Perdidas de la mitad de producción por Moniliasis (Ávila et al., 2013). Daños a la salud y ambiente (López et al., 2006).

MATERIALES Y MÉTODOS Zonas muestreos Ubicación del estudio Laboratorio de Microbiología UNA, Facultad de Agronomía. 12°08´51.24” latitud norte 86°09´50.66” longitud oeste 59 msnm.

Recolección y manejo de las muestras Colecta de frutos con moniliasis Muestras de tejido (fruto, hoja y corteza) Colecta de antagonistas Muestras de suelo

Aislamiento de Moniliophthora roreri Metodología 1. Modificada de Suárez y Rangel (2014) Lavado de fruto Cortes parte enferma/sana Explantes 5×5 mm Metodología 2. Modificada de Villamil et al. (2012) PDA

Aislamiento de hongos antagonistas Procesamiento de suelo Modificado de Suárez y Rangel (2014) PDA con 800 µl·l-1 Sulfato de Gentamicina 10-2 10-3 10-4 10-1 100 µL 10-4 10-3 Suelo Procesamiento de tejido vegetal Modificado de Arnold et al. (2000) Cortes de 5×5 mm Hoja

Aislamiento de hongos antagonistas Procesamiento de tejido vegetal Modificado de Arnold et al. (2000) Corteza Cortes de 5×5 mm Cortes de 5×5 mm Fruto

Protocolo de desinfección de tejido vegetal Condiciones: - PDA - pH 5.5 - 800 µl·l-1Sulfato de Gentamicina - 25 °C

Identificación de Moniliophthora roreri Clave taxonómica de Barnett y Hunter (1999), características macroscópicas descritas por Phillips et al. (2006) y microscópicas por Evans et al. (1978). Identificación de hongos antagonistas Claves taxonómicas: Barnett y Hunter (1999) Domsch, Gams y Anderson (1980) Schroers et al., (1999)

Pruebas de antagonismo in vitro Técnica de enfrentamiento dual (Howell, 2003), evaluando 68 tratamientos. Se utilizó un DCA con 6 réplicas. ANDEVA y diferencia de medias Tukey (α=0.05). Distancia 6 cm Distancia 4 cm CULTIVO DUAL Paecilomyces-Moniliophthora CULTIVO DUAL Clonostachys-Moniliophthora CULTIVO DUAL Trichoderma-Moniliophthora Condiciones: PDA, pH 5.5 , 25 °C, 12 horas luz/12 oscuridad

Competencia por espacio y nutrientes Guigón et al. (2010) TCR= (CRF - CRI) / TI Tasa de Crecimiento Variables de crecimiento radial Ritmo de Crecimiento French y Hebert (1982) variables Promedio del crecimiento radial acumulado en mm Media de Crecimiento Tiempo de contacto Antagonista-Patógeno Días Competencia por espacio y nutrientes Porcentaje de Inhibición del Crecimiento Radial Samaniego et al. (1989 PICR= [(R1 - R2)/R1] x 100 Competencia por sustrato Escala de Bell et al., (1982) Micoparasitismo Interacciones hifales antagonista-patógeno

RESULTADOS Y DISCUSIÓN Aislamiento e identificación de M. roreri ´ ´

Aislamiento e identificación de M. roreri ´ ´

Aislamiento e identificación de M. roreri Forma de las esporas de M. roreri Elípticas (E) Subglobosas (S) Globosas (G) Longitud y porcentaje de las esporas de M. roreri Forma Longitud (µm) % Globosas 4.91 68 Subglobosas 7.79 16 Elípticas 10.37

Aislamiento e identificación de antagonistas 2 Corteza 11 Aislados Trichoderma 5 4 Hoja 5 Aislados Paecilomyces Fruto 1 Aislado Clonostachys Suelo

Localidad y procedencia de aislados de hongos antagonistas

Hongos nativos con mayor potencial antagónico Aislado Código MCR (mm) TCR (mm d-1) PICR (%) Días a contacto A-P TSMS 27.43 16.8 46.77 PaLV 26.63 2.06 67.43 Clonost 24.30 3.72 67.62 2- 3 d 6- 8 d 7 d

Trichoderma sp vs M.roreri Paecilomyces sp y Clonostachys sp Hongos nativos con mayor potencial antagónico Competencia por espacio y nutrientes según escala de Bell et al., (1982) Trichoderma sp vs M.roreri Paecilomyces sp y Clonostachys sp vs M.roreri Enfrentamiento TSMF-MUF-29 12 (a) Enfrentamiento TERS-MLV (b) Enfrentamiento PaLV-MSM (a) Enfrentamiento Clonost-MUF-29 12 (b) a b Grado 1 Grado 2 Grado 3

Hongos nativos con mayor potencial antagónico Micoparasitismo Trichoderma sp (T) M. roreri (M) Penetración Enrollamiento Lisis

EDUNABIO- MSc. Camilo Beltrán y Dra. Martha Gómez CORPOICA - Colombia AGRADECIMIENTO EDUNABIO- MSc. Camilo Beltrán y Dra. Martha Gómez CORPOICA - Colombia RITTER SPORT – Nicaragua UNA

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