Microscopía de Contraste de Fases. USOS: es de un valor incalculable para el estudio de células vivas, en el exámen de preparaciones húmedas y de gota pendiente. JUSTIFICACIÓN: con la iluminación normal, resulta muy difícil el estudio de preparaciones de densidad homogénea y transparentes como bacterias y células cuya capacidad de absorción de la luz es tan pequeña que la imagen no presenta diferencias de luminosidad entre sus elementos . Estas diferencias de absorción de la luz y su trayectoria en las células y el medio externo, retrasan y desvían las ondas luminosas que atraviesan la célula. El microscopio de Contraste de Fase pone de manifiesto estas pequeñas diferencias en las células, sus estructuras y su medio externo, las cuales no son discernibles por otros métodos ópticos.

Diferencias entre Microscopio Optico Convencional y Microscopio de Contraste de Fases El Microscopio de Contraste de Fases Contiene: Diafragma anular en el Condensador que consta de un anillo transparente con la parte central oscurecida y que forma un cono de luz hueco como el del microscopio de campo oscuro. Placa de Difracción ó Placa de Fase dentro del tubo del sistema de lentes objetivos, la cual consta de un anillo ranurado a manera de disco. Ocular similar al del microscopio de campo claro.

Diafragma Anular del Condensador y Anillo de Fase ó Placa de Difracción Lente del Condensador Oscurecida en el Centro

Mecanismo de Función del Microscopio de Contraste de Fases. En las células y en las bacterias existen pequeñas diferencias ópticas debido a sus densidades apenas diferentes y las consiguientes diferencias de absorción de la luz y con respecto a su medio exterior. Estas diferencias de densidades ( y de absorción y trayectoria de la luz ) de las células, su medio interno y su medio externo, retrasan y desvían las ondas luminosas que atraviesan la célula.

Funciones del Condensador Cuenta con un dispositivo similar al del campo oscuro que forma un cono de luz hueco en el centro.Su sistema óptico descompone la luz en dos partes: Luz que llega sin desviar al objetivo Luz que llega desviada al objetivo

Funciones del Objetivo Contiene en su interior, una Placa de Fase ó Placa de Difracción que es un anillo ranurado a manera de disco dentro del tubo del sistema de lentes objetivos, el cual es un disco de vidrio óptico, recubierto con una fina capa metálica para absorber la luz, así como con una capa de material dieléctrico, que retarda la luz. Así, la luz que pasa por el exterior del anillo ( luz no desviada ) se retrasa ¼ de longitud de onda con respecto a la que pasa por su interior ( luz desviada ).

Cono de Luz que Incide sobre el Objetivo en Microscopio Óptico

Trayectoria que Sigue la Luz en el Microscopio de Contraste De fases.

VÍA ÓPTICA DEL MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES La luz incidente atraviesa un diafragma anular, y la lente del condensador focaliza un anillo circular de luz sobre la muestra. La luz que pasa sin obstáculos a través de la muestra es focalizada por el objetivo sobre el grueso anillo gris de la placa de fase, que absorbe parte de la luz directa y altera su fase en un cuarto de longitud de onda.Si una muestra refracta ó difracta la luz, se altera la fase de algunas ondas lluminosas y éstas se redirigen a través de la delgada región clara de la placa de fase. Se recombinan las luces refractada y no refractada en el plano de la imagen para formar la imagen.

Ocular de AMICI-Bertrand