HEMOGRAMA MANUAL Bqco. Gonzalo A Ojeda Cátedra Hematología Clínica Fa.C.E.N.A-U.N.N.E 2013

Definición ES EL ESTUDIO CUALI Y CUANTITATIVO DE LOS ELEMENTOS CORPUSCULARES DE LA SANGRE CUANTITATIVO : Recuento de GR, GB Dosaje de Hb Índices Hematimétricos ( VCM, HCM, CHCM ) Fórmula Leucocitaria CUALITATIVO Estudio Morfológico de la Serie Roja, Serie Blanca y Pq

Determinaciones Adicionales RECUENTO DE Pq Reticulocitos VSG

ETAPA Pre-ANALÍTICA Condiciones del Paciente Tipo y Toma de Muestra

Condiciones del Paciente NO NECESITA ESTAR ESTRICTAMENTE EN AYUNAS (se sugiere al menos 2 h). NO HABER REALIZADO ACTIVIDAD FÍSICA INTENSA PERMANECER PREFERENTEMENTE SENTADO DURANTE LA EXTRACCION

DATOS A TENER EN CUENTA EDAD DX. PRESUNTIVO SEXO

REFERENTE A LA MUESTRA TIPO DE MUESTRA -VENOSA -CAPILAR -ARTERIAL??

PUNCION VENOSA VENTAJAS -Técnica rápida y segura -Permite obtener volúmenes adecuados para las demás determinaciones. -Permite repetir el análisis en caso de dudas. -Reduce los posibles errores de la punción capilar. DESVENTAJAS -Resultados erróneos por hemo- concentración (torniquete pro- longado) -Hematomas y dolor (extracción dificultosa) -No se recomienda en neonatos o pacientes quemados. -Paciente Oncológicos

PUNCION CAPILAR VENTAJAS -Resulta sencillo para neonatos y niños -Se puede realizar más de una vez en pacientes especiales (que- mados, oncológicos, etc) -Útil en pacientes con patologías Hemorrágicas. DESVENTAJAS -Recuentos erróneos por hemo- concentración o hemodilución Dificultad para obtener flujo continuo. -Recuentos de Pq disminuidos, coagulación. -Errores por contaminación -Paciente Oncológicos

ANTICOAGULANTES SALES DE EDTA :(Na2 o K3) Forman complejos con el Ca++, efectivo en pequeñas cc, no necesita ser evaporado (Posible error por dilución a tener en cuenta) 0.01mL (10 μL) sirven para anticoagular hasta 2,5 mL de sangre LA RELACION NORMALMENTE USADA ES 10 μL más 1 mL (990 µL) de sangre (1/100) PERMITE CONSERVAR EN HELADERA LAS MUESTRAS HASTA 48h SIN ALTERAR LOS VALORES MEZCLAS DE OXALATOS DE AMONIO Y POTASIO ( MEZCLA DE WINTROBE) Actúa precipitando el Ca²+ Proporción 1/10 (0.5 mL ACG EVAPORADO a 37 + 5 mL sangre) HEPARINA: Actúa neutralizando la trombina. Proporción 10-50 UI/mL sangre. (COLORACIÓN)

ACTIVIDAD TENIENDO EN CUENTA PROPORCIONES CALCULE: - volumen de EDTA-Na2 para anticoagular 3 mL de sangre -volumen de EDTA–Na2 para anticoagular 2 mL de sangre

Obtenida la muestra HOMOGENEIZAR !!!!! LENTA Y REPETIDAS VECES ANTES DE PROCESAR : HOMOGENEIZAR LENTA Y REPETIDAS VECES!!!

ETAPA ANALÍTICA RECUENTOS DE GB , GR y Plq Hematocrito Dosaje de Hb Fórmula Leucocitaria

RECUENTO DE GB DILUYENTE: LIQUIDO DE TURK -Acido acético glacial (20 mL) -Cristal Violeta 1% (10 mL) -Levar a 1000 mL con agua destilada Dilución : 1/20 380 μL + 20 μL muestra

Muestra Homogeneizar Por agitación Secar con papel el dispositivo de cargado

RECUENTO DE GB CAMARA DE NEUBAUER PIPETAS

CAMARA DE NEUBAUER Se trata de un portaobjetos con una depresión en el centro, en el fondo de la cual se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula. Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una separación entre dos líneas consecutivas de 0.25 mm. Así pues el área sombreada y marcada L corresponde a 1 mm². La depresión central del cubreobjetos está hundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos éste dista de la superficie marcada 0.1 mm, y el volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de 0.1 mm³.

Aumento 10X

Aumento 10x

Consideraciones prácticas PARA CARGAR LA CAMARA : SE COLOCA EL CUBRE OBJETO Y ACERCANDO LA PUNTA DE LA PIPETA O EL CAPILAR SE LLENA POR CAPILARIDAD EL LLENADO DEBE HACERCE DE UNA SOLA VEZ SIN QUE QUEDEN BURBUJAS, NI LÍQUIDOS EXEDENTES ALREDEDOR DEL CAMPO NO BALANCEARLA AL ACERCAR AL MO PARA DISTINGUIR DE BASURAS MOVER EL TORNILLO MICROMETRICO. NO DEMORARSE

Elementos contados 4 mm² X 1mm² X N / 4 Dado que el espesor de la cámara es 0.1 mm, para expresar el número de elementos por mm³ deberemos multiplicar el valor X por 10. X= (N/4) X 10 Como se ha efectuado una dilución de 1/20, debemos multiplicar por la dilución, es decir: X= Nx10x20= N x 50= Nº de GB/mm³ 4 Según el ICSH, debe expresarse este resultado en Nº de GB. 10x9/l

Cálculos

Valores de Referencia ADULTOS : 5000 a 10.000 GB / mm³ NIÑOS - RN : 12.000 a 25.000 GB / mm³ - Hasta 1 año : 6000 a 18.000 GB / mm³ 3 a 6 años : 5000 a 15.000 GB / mm³ 6 a 12 años: 4500 a 13.500 GB / mm³

ACTIVIDAD EXPRESAR 6500 GB/mm3 En: cel / dL cel / µL (notación científica) cel / L (notación científica)

CAUSAS DE ERROR DEL MATERIAL CUBREOBJETOS MAL COLOCADO SUCIEDAD ,LEVADURAS EN EL LIQUDO DE DILUCION RESTOS DE G.R. APELOTAMIENTO DE LEUCOCITOS DESGASTE DE TECNICA EXTRACCION DE SANGRE DILUCION (PIPETA MAL ENRASADA) LLENADO DE CAMARA EN FORMA DESIGUAL AUTOAGLUTINACION DEL OPERADOR DIFERENCIAS DE UN INDIVIDUO A OTRO FATIGA OCULAR

LEUCOCITOSIS FISIOLÓGICAS Embarazo, Lactancia, Puerperio, Período menstrual Ejercicio violento, Stress.

LEUCOCITOSIS PATOLOGICAS CAUSAS INFECCIOSAS -Bacterias piógenas : Strepto, Staphylo , Meningo y gonococo. -Tos convulsa (Bordetella) Leucocitosis con Linfocitosis -Sarampión (Inc) -Cuadros septicos : Peritonitis, Neumonía CAUSAS NO INFECCIOSAS -Cuadros inflamatorios -Post hemorragias -Vómitos, convulsiones, crisis eclámp- sicas, epilepsia, taquicardias -Hipertemias no infecciosas -Quemaduras extensas -Sock traumático -IMC, necrosis de tejido tumoral, pan- creatitis. -Leucemias -Enfermedades metabólicas : DBT, Coma diabético, Acidosis -IRC -Endócrinopatias : Cushing - Corticoterapia

Leucopenias -Digestiva (post prandial) -Constitucional (Rara) tener presente resultados previos -Digestiva (post prandial) -Infecciosa: fiebre tifoidea y paratifoidea -Sepsis de mala evolución -Casi todas las virosis (Sarampión, Varicela, Gripe, Neumonía ) -Intoxicación por benzoles o sulfas -Hemopatías: Leucemias leucopénicas, aplasia medular, etc -Afecciones hepatoesplénicas -Cirrosis hepática, trombosis de la vena porta o esplénica -Leucopenias alérgicas, shock anafiláctico -Afecciones reumáticas -Quimioterapia -Leucopenias carenciales -Colagenopatías: LES, Esclerodermia -AINES

DOSAJE DE Hb Método de la Cianmetahemoglobina Fue recomendado por el Comité Internacional para la Estandarización de Hematología (ICSH) en 1966, modificado en 1977 y sigue siendo hasta hoy el más recomendado.

REACTIVO DE DRABKIN Fe(CN)6K3---------------200 mg KCN---------------------------- 50 mg K3HPO3--------------------140 mg Sterox Se o Triton X-100-------1 mL Llevar a 1L con agua destilada y ajustar el pH a 7,2 con H3PO4 0.1 N o con KOH 0.1N. Guardar en frasco color caramelo, a T amb, estable 6 meses.

Fundamento del Método Hb ( Fe II ) Fe(CN)6K3 Meta Hb ( Fe III) KCN CIANMETAHEMOGLOBINA MAXIMO DE ABS A 540 nm

Técnica 5 mL Rvo Drabkin + 20 μL sangre entera anticoagulada 5 minutos Leer a 540 nm en espectrofotómetro o en fotocolorímetro con filtro verde

Curva de calibración Se realiza cada vez que se prepara o adquiere reactivo. Kits comerciales : 3 niveles ( bajo, normal, alto ) Muestra testigo de cc conocida (trabajo con dilución al ½ y con el doble )

Curva de Calibración Abs A=Ɛ.b.C y=ax+b g/dL

ACTIVIDAD A=ξ b C  despejar C y especificar Unidades (g/dL) Idem desde la pendiente del gráfico

VENTAJAS DE LOS METODOS MUESTRA TESTIGO -Controla la linealidad del equipo -Controla la manipulación del material de medición volumétrico (en forma indirecta) pues el patrón se procesa como si fuese una muestra -Posible deterioro del reactivo Variaciones de tensión, Int de la Lampara,etc. KIT COMERCIAL Controla la linealidad del equipo -Estado del rvo

Para tener en cuenta La determinación de un patrón diario nos permite: -Controlar que el reactivo no ha sufrido deterioro -Controlar el factor humano -Cambios en la tensión eléctrica o funcionamiento del equipo de lectura.

VALORES DE REFERENCIA Bibliografía Laboratorio Mujeres 11,5 - 14 g% Varones 13,5 – 17 g% 13 – 17 g%

HEMATOCRITO O VOLUMEN GLOBULAR

Definición ES EL VOLUMEN DE MASA GLOBULAR EXPRESADO COMO UN % EN EL VOLUMEN DE SANGRE TOTAL

Técnica 1-SE CARGAN TUBOS CAPILARES: Sangre venosa : Sin heparina Punción digital: Con heparina 2-LLENAR HASTA 2/3 EL CAPILAR Y CERRAR EN UN EXTREMO CON PLASTILINA 3-CENTRIFUGAR EN CENTRIFUGA ESPECIAL: 15000 rpm 5 a 6 min 4-LEER EN ABACO ESPECIAL

MICROCENTRÍFUGA

VENTAJAS RÁPIDO < VOLÚMEN DE SANGRE TUBOS CAPILARES DESCARTABLES MAS EXACTO YA QUE AL CENTRIFUGAR LA SANGRE A MAYOR VELOCIDAD EL VOLUMEN DE PLASMA ATRAPADO POR LOS G.R. EN DICHA CAPA ES <

Valores de referencia Recién Nacido 52 – 65 % Varones 40 – 48 % Mujeres 37 – 47 %

-FASE DE RECUPERACIÓN DE PERDIDA DE SANGRE VALORES ALTOS POLIGLOBULIA REAL HEMOCONCENTRACION : QUEMADURAS , ECLAMPSIAS, SHOCK QUIRURGICO O TRAUMATICO ESTADOS DE DESHHIDRATACION (VOM. DIARREAS, DIABETICOS) HIPOXIA DE LAS ALTURAS FUMADORES VALORES BAJOS -ANEMIAS -FASE DE RECUPERACIÓN DE PERDIDA DE SANGRE -EMBARAZADAS

RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS EL CONTAJE HA ADQUIRIDO MUCHA PRESICION CON LOS METODOS AUTOMATIZADOS EL RECUENTO EN CAMARA ES OBSOLETO Y SUJETO AGRAVES ERRORES TANTO QUE CUANDO NO SE DISPONE DE VALORES POR AUTOMATIZACION ES MEJOR PRESCINDIR DE ESTE DATO Y GUIARSE POR LOS VALORES DE HTO Y HB.

VALORES DE REFERENCIA Mujeres 4 – 4.8 millones/mm³ Varones : 4.5 -5.5 millones / mm³ RN : 5.6 millones / mm³ 4 semanas: 4 millones/ mm³ 6 semanas: 3.6 millones/ mm³ 12 semanas : 3.8 millones/mm³ 6 a 12 años : 4.5 millones / mm³

INDICES HEMATIMÉTRICOS VCM HCM CHCM Expresa el volumen medio del GR Cantidad de Hb contenida en un hematie % de Hb contenida en la masa globular total 90 ± 5 fL 29 ± 3 pg 30 – 34 % Hto x 10 GR Hb x 10 GR Hb x 100 Hto

ACTIVIDAD EXPRESAR CON UNIDADES VCM (fL) HCM (pg)

ANÁLISIS DE FROTIS SANGUÍNEOS

Coloración May Grüwald - Giemsa -Eosinato – Azul de Metileno -Metanol Giemsa -Eosinato de Azur II -Azur II -Glicerina y Metanol

TÉCNICA 1-Realizar el extendido – Dejar secar- Rotular 2- Cubrir 3 minutos con MG (FIJACIÓN) 3-Agregar en igual proporción al colorante buffer o agua común : agua destilada (1:1) con movimientos sin eliminar todo el colorante anterior (ACTIVACION) 4-Volcar la mezcla anterior y (enjuagar) cubrir con Giemsa al 10% durante 15 minutos. PREPARAR EN EL MOMENTO 5-Dejar secar – Observar con Aceite de Inmersión

MG Metanol : Agente Fijador Eosinato : colorea partes básicas del citoplasma (rosado) : hematíes, gránulos de Eos, citoplasma de granulocitos. Azul de Metileno: granulaciones específicas de granulocitos, nucleolos, citoplasmas basófilos, hematíes policromatófilos, colorea levemente el núcleo.

Giemsa Colorea fuertemente las granulaciones inespecíficas (azurófilas), colorea además fuertemente los núcleos diferenciando la cromatina. Tiñe también cuerpos de Howell Jolly, anillos de Cabot y Bastones de Auer

RESUMIENDO… NÚCLEOS: En violeta rojizo CITOPLASMA DE LAS CELULAS LINFOIDEAS :en azul -celeste luminoso. Los gránulos linfoideos en rojo purpúreo LOS GRANULOS NEUTRÓFILOS .en rosado pardusco LOS GRANULOS EOSINÓFILOS: en naranja pardo o rojo ladrillo LOS GRANULOS BASÓFILOS: En azul marino con tonalidad violácea ERITROCITOS en rosado rojizo

BASOFILO NEUTROFILO LINFOCITO EOSINOFILO MONOCITO

Fórmula Leucocitaria Cayados…………0 - 2% Neutrófilos……….50 - 70% Eosinófilos……….0 – 8 % Basófilos…………0 – 1% Linfocitos…………20- 40 % Monocitos……….. 4 – 6 %

OCULARES OBJETIVOS PLATINA MACRO CONDENSADOR MICRO

PARA LOS TRABAJOS PRÁCTICOS GUARDAPOLVO O CHAQUETILLA 2 PARES* DE GUANTES POR PERSONA MATERIAL DE EXTRACION (AGUJAS, JERINGAS, LAZO, ALGODÓN ALCOHOL, CINTA DE PAPEL) MARCADOR PARA ROTULAR

POR GRUPO DE LABORATORIO 1 ROLLO DE COCINA X 3 1 LITRO DE LAVANDINA (MARCA) 1 BOTELLA DE ALCOHOL 250 CC

PAUTAS DE TRABAJO ORDEN Y ORGANIZACIÓN CONCEPTOS TEÓRICOS LLEVADOS A LA PRÁCTICA (COLOQUIO) LIMPIEZA (ROTULADO)

INFORME INDIVIDUAL HOJA A4 FOLIO A4 DÍA MIÉRCOLES AL INICIO DE CLASES G1-20 HOJA A4 FOLIO A4 DÍA MIÉRCOLES AL INICIO DE CLASES

GRUPO 1 (15:00 – 17:00) GRUPO 2 (17:00 – 19:00) AGÜERO CORONA ROMINA ARRÚA JOSÉ ALARCÓN PATRICIA BARONI PIETTO MARIA ALVAREZ JUAN MARCELO BERTONA VANNINA ARANDA MARIA BELEN CERULLO FABIAN BREGANT MATIAS COMPARIN LAURA CASTILLO RÚVEDA EDUARDO DEZOTTI EDGARDO DORNELES GABRIEL FERNANDEZ SOSA ELIANA ESCALANTE ROSAURA GARCIA PABLO GONZALEZ VIANO VALERIA GOMEZ HERNAN LEDESMA RUBEN MONJE ANALIA MARTINEZ VALERIA MONTAÑEZ LUCAS MENDOZA MAYRA PENTENERO MARIANA MIJALEC TATIANA PINTO MARÍA TOMASZUK ANA

FIN