Métodos de Estudio Empleados en Fisiología Clase No. 2 / 22 de julio de 2009

Regla general para el estudio de la fisiología Iniciar la investigación/estudio a nivel macro y trabajar bajando de escala de tamaño hasta los niveles más finos. Por ejemplo iniciar con observaciones macroscópicas y microscópicas de estructura y organización hasta llegar a niveles moleculares.

PROTOCOLO GENERAL DE UN ESTUDIO FISIOLÓGICO Examen visual Localización y separación de componentes y órganos Localización y separación de organelos celulares Separación de macro y micromoléculas y otros compuestos relacionados Bioensayos

Toda conclusión a la que se llegue como resultado de un estudio fisiológico debe ser confirmada con animales completos (bioensayos con animales completos) en condiciones iguales (similares) a las que se espera que afronte el individuo.

Niveles de Evaluación Visual Ojo desnudo: examen macroscópico Observación al microscopio: examen microscópico Microscopía de luz Otros tipos de microscopía común Microscopía electrónica y sus múltiples variaciones

Clase No. 3 julio 23 de 2009

Observación macroscópica Observación al microscopio Microscopía electrónica Observación al microscopio

Separación de órganos, tejidos y componentes

Separación de Componentes Celulares y Organelos Microanálisis utilizando rayos X y microscopía electrónica Histoquímica e immunohistoquímica Centrifugación y fraccionamiento de células

Corte histológico de branquias a diferentes aumentos y con coloraciones inmunohistoquímicas para la identificación de enzimas involucradas en la osmorregulación Clase No. 3 / 16 de julio de 2008

Control y 24 horas de exposición a ambiente salobre Localización de enzimas en branquias de peces utilizando fluorescencia y principios immuno-histoquímicos Anticuerpos fluorescentes utilizados para detectar componentes celulares

Separación de macro y micromoléculas Electroforesis Western Blots Cromatografía (de columna, filtración con gel y otros substratos, de intercambio de iones, de afinidad, HPLC). Radio immunoensayos Aislamiento, secuenciación, y clonación de ácidos nucléicos, northern blots, southern blots. PCR

Electroforesis Fotografía y resultado de una corrida electroforética Geles de electroforesis

Bioensayos Perfusión de branquias Aislamiento de organismos y/o tejidos Respirómetros Cámaras de natación

Perfusión de branquias Branquias de Anodonni grandis que fueron extraídas y cultivadas por un lapso de 40 días Muestra cultivo con menos de 24 hrs Mayor magnificación de la branquia Cultivo después de 30 días Cultivo después de exposición experimental

Diagrama general de un respirómetro

Respirómetro empleado para evaluar la natación y tasa de consumo de oxígeno de anguilas bajo distintas condiciones. Este mismo aparato se emplea para evaluar otras especies

Respirómetro de tipo túnel que se emplea para medir y evaluar la natación en peces, en este caso de un túnido.