Gravina, Luis Pablo 1 ; Prieto María Eugenia 3 ; Garrido Jennifer 2 ; Foncuberta María Eugenia 1 ; Hugo, Martin 3 ; Barreiro, Cristina 2 ; Chertkoff; Lilien 1 Laboratorio de Biología Molecular (Genética) 1. Servicio de Genética 2. Servicio de Otorrinolaringología (ORL) – Programa de Implante Coclear 3. Hospital de Pediatría “Prof. Dr. Juan P. Garrahan”. Buenos Aires. CONCLUSIONES MUTACIONES EN LAS CONEXINAS 26 Y 30 EN NIÑOS CON SORDERA NO SINDRÓMICA INTRODUCCION Estos resultados permiten concluir que las mutaciones en Cx26 y Cx30 son una importante causa de SNSR en nuestra población. La presencia de (GJB6-D13S1830) en el 5,6% de los alelos analizados y más aún, la detección de un sujeto homocigota, muestra que el estudio de la Cx30 debe formar parte del diagnóstico molecular de pacientes con hipoacusia neurosensorial no-sindrómica. Si bien la mutación 35delG es ampliamente mayoritaria, la incorporación de 167delT y la deleción de Cx30 (GJB6-D13S1830) al diagnóstico de esta patología aumenta significativamente el número de pacientes detectados con genotipo completo. La secuenciación de Cx26 en el grupo de pacientes sin mutaciones identificadas permitirá establecer la real contribución de las conexinas 26 y 30 en el desarrollo de las sorderas no sindrómicas. MATERIALES Y METODOS Población estudiada 36 pacientes con hipoacusia neurosensorial no sindrómica severa a profunda (24 mujeres y 12 varones; rango etario: 19 meses a 17 años). 24 familiares en primer grado (hermanos y padres). Cirterios de exclusión: Pacientes con anomalías asociadas a sorderas sindrómicas o con malformaciones aisladas, antecedentes de riesgo audiológico y alteraciones neurológicas. El estudio de padres y hermanos permitió confirmar herencia autosómica recesiva y detectar portadores La secuenciación de Cx26 permitió completar el genotipo en 2 pacientes. No se detectaron mutaciones nuevas. Determinar la contribución de las mutaciones en las Conexinas 26 y 30 en el desarrollo de sorderas no-sindrómicas recesivas en una población pediátrica de Argentina. La sordera es una patología compleja que afecta a alrededor de 1/1000 niños. Un 50-60% de los casos se debe a factores genéticos, la mayoría de los cuales son no sindrómicos y de herencia autosómica recesiva. El primer locus asociado con sordera no- sindrómica fue DFNB1, localizado en 13q12. Este locus contiene el gen GJB2, que codifica para la Conexina 26 (Cx26), una proteína de membrana que se expresa en la cóclea. Un 50% de las sorderas no-sindrómicas recesivas (SNSR) está causado por mutaciones en el gen GJB2. En la mayoría de las poblaciones estudiadas, aún con el análisis exhaustivo del gen GJB2 se observó que un número inusualmente alto de pacientes presentaban un único alelo GJB2 afectado. Recientemente se describió, en población española, una deleción de 342Kb en el gen GJB6 muy cercano al anterior que codifica para la Conexina 30 (Cx30). Esta deleción, denominada (GJB6-D13S1830), se detectó en alrededor del 50% de los pacientes heterocigotas GJB2, siendo la segunda mutación más frecuente en España detrás de 35delG. En nuestra población, un estudio preliminar de mutaciones en Cx26, mostró una alta prevalencia de 35delG y la presencia de 167delT, una mutación frecuente en judíos Ashkenazi. Genotipos identificados N° de familias GenotipoGrado de sordera 535delG/35delGBilateral profunda 2 35delG/(GJB6-D13S1830) Bilateral profunda 1 (GJB6-D13S1830)/(GJB6-D13S1830) Bilateral profunda 135delG/167delTBilateral profunda 135delG/R143WBilateral profunda 1167delT/V37IBilateral profunda 235delG heterocigotaBilateral profunda OBJETIVO Figura 3 Figura 1 165bp 97bp 68bp Figura 2 Análisis Molecular Se extrajo ADN genómico a partir de leucocitos de sangre periférica por precipitación salina. Las mutaciones 35delG y 167delT se analizaron mediante PCR-RFLP utilizando las enzimas BslI y PstI respectivamente. (GJB6-D13S1830) se estudió por PCR multiplex con primers que amplifican la secuencia normal y secuencias adyacentes a la deleción. Se secuenció la región codificante de Cx26 (exon 2) en los pacientes heterocigotas utilizando primers descriptos previamente (ABI Prism 310 – Applied Biosystems). RESULTADOS Se detectaron mutaciones en 13 pacientes (36%). En 11 se estableció el genotipo completo y en 2 se identificó una sola mutación. 35delG (GJB6-D13S1830) 167delT Alelos detectados R143W V37I