Mg Dra. Elsi Vargas de Salinas BUENAS PRACTICAS EN LA PREPARACION Y CONTROL DE CALIDAD DE HEMOCOMPONENTES Mg Dra. Elsi Vargas de Salinas elsivargasal@yahoo.com B

LA SANGRE Y SUS COMPONENTES La sangre es un órgano líquido con las siguientes funciones : Transporte de nutrientes Transporte de gases de la respiracion O2 y CO2 Transporte de substancias a ser excretadas Transporte de hormonas Regulacion de la concentracion de electrolitos Sistema imunológico y fagocitosis Coagulación

O sangue e seus componentes LA SANGRE CONTIENE COMPONENTES SÓLIDOS Y LÍQUIDOS: Sangre Células Plasma Eritrócitos Leucócitos Trombócitos Agua Proteínas Electrolitos

Plasma Un litro de plasma normalmente contiene: 900 ml de água 65 a 80 g de proteínas (albumina e globulinas) 9 g de eletrólitos Adicionalmente gorduras, carboidratos, vitaminas, hormônios, etc. Funciones del plasma: Transporte de células sanguíneas y nutrientes Control del balance hidro-eletrolítico Soporte del sistema imunológico (anticuerpos) Suplemento de factores de coagulación necesários para el processo de hemostasia

ERITROCITOS (Glóbulos Rojos) Propiedades de los eritrócitos - Discos biconcavos, redondeados y sin núcleo - Producidos en la médula ósea - Vida media de 120 días - Coloración roja resultante del contenido de hemoglobina Funciones -Transporte de oxigeno (y dióxido de carbono). - Controle del nível de pH de la sangre Hematócrito = volume de eritrócitos en relación al volumen de sangre total Valor médio para hombres 47 % y mujeres 40 %

Leucocitos (glóbulos blancos) Propiedades de los leucocitos Células nucleadas Diferenciación en linfócitos (L) granulócitos (G), monócitos (M) Vida media: algunos dias a varios años Funciones de los leucocitos: Protección contra agentes infecciosos – fagocitosis y producción de anticuerpos (inmunización) Remoción de las células muertas Los leucocitos son los transportadores del sistema HLA responsable de la incompatibilidad de la transfusión o transplante.

Trombocitos (plaquetas) Propiedades de las plaquetas: Células discóides y sin núcleos Producidas en la médula ósea Vida media de 8 a 14 días Funciones de las plaquetas: Coagulación de la sangre

Factores que influencian en la calidad de los hemocomponentes 1- LA COLECTA Homogenización de la sangre con el anticoagulante Estandarización del volumen y el tiempo de colecta 2- REFRIGERACION DE LA SANGRE Pre-almacenamiento y antes de la separación de los hemocomponentes 3- PREPARACION Tipo de bolsa – convencional o TAB Separación manual o automatizada Remoçión de los leucocitos por filtración Congelamiento del plasma 4-ALMACENAMIENTO

1- LA COLETA DE SANGRE La colecta de sangre total de un donante debe ser realizada en 12 minutos A-Tiempo de donación < 12 1/2 minutos Indicada para todos los componentes B-Tiempo de donación > 12 1/2 minutos y < 20 minutos No es indicada para separación de plaquetas % de FVIII en el plasma es menor que lo normal C-Tiempo de donación > 20 minutos No es indicada para la separación de componentes

Homegeneización de la sangre durante la 1- LA COLETA DE SANGRE Homegeneización de la sangre durante la colecta Prevenir a la formación de trombina Consumo de factores de la coagulación Activación de plaquetas Tipos de agitación Manual Mecánica *Control del volumen *Control del tiempo y flujo -Tiempo de colecta < 12 minutos Homogeneizar la sangre contenida en el plato de coleta con el contenido de la bolsa manualmente .

Tiempo y temperatura de almacenamiento pre-procesamiento Procedimiento 1: Enfriar la sangre total a 4 °C lo mas rápido posible . Crioprecipitación de Factor VIII y sedimentación con los hematíes Activación de las plaquetas Procedimiento 2: Enfriar la sangre total a 20-24 °C después de la colecta Enfriamiento con agua fría o butano-1,4-diol (2 horas) Tiempo de almacenamiento Procesamiento inmediato: activación de las plaquetas y baja estabilidad de los hemocomponentes. Problema logístico para unidades externas 4 a 6 horas: no afecta el almacenamiento de los hematíes (nivel de 2,3-DPG). Leucócitos presentes actúan como agentes bactericidas en este periodo (reducción de la contaminación bacteriana) > 8 horas: deplección de 2,3-DPG y Factor VIII

Sistemas de bolsas de sangre ((T&T) Bolsa simples Colecta de sangre total con agente preservante (CPDA-1). Bolsa dobles Separación de plasma y hematíes (contiene buffy coat). Bolsas triples Preparación de plasma, hematíes y plaquetas de plasma rico en plaquetas ( PRP). Bolsas cuadruples Preparación de plasma,hematíes y plaquetas de buffy coat

Sistemas Top and Bottom (T&B) Diferente a los sistemas convencionales (T&T),los sistemas T&B contienen tubos de salida en la parte superior e inferior de la bolsa principal. Despúes de la centrifugación , el plasma es extraído por el tubo superior y los hematíes son trasferidos para una bolsa satélite por el tubo inferior. El buffy coat permanece en la bolsa. Consecuentemente el número de leucocitos en el concentrado de hematíes es menor que del sistema T&T. E L T P

Soluciones artificiales para conservación de células Tipos de Soluciones SAGM (Salina, Adenina, Glucosa y Manitol) PAGGSM (Fosfato, Adenina, Glucosa, Glutamina, Sorbitol y Manitol) (SAG-M)Ventagas Prolonga el tiempo de almacenamiento a 42 días. Reduce la viscosidad  mejor fluidez durante la transfusión. Disminuye la contaminación del CGR por plasma disminuyendo asi la incidencia de reacciones alergicas. Permite mayor libertad en la selección de GRC para la transfusión, evitando los problemas de transmisión de anticuerpos anti-A y anti-B a receptores que poseen los respectivos antígenos en sus hematíes. Aumenta el rendimiento del plasma, sin contaminación con nutrientes para hematíes .

INFLUENCIA DE LA PERMEABILIDAD DEL PLÁSTICO SOBRE LAS PLAQUETAS GLUCOSA DIOXIDO DE CARBONO CO2 O2 BOLSA PERMEABLE: ADECUADO FORTALECIMIENTO DE OXIGENO MANTENIMIENTO DE LA CONC. DEL BICARBONATO Y DEL PH

Desafios da Sorologia GLUCOSA ACÍDO LÁCTICO CONSUMO DE BICARBONATO Y BOLSA IMPERMEABLE EL NUMERO EXCESIVO DE CÉLULAS: DISPONIBILIDAD DE OXIGENO CONSUMO DE BICARBONATO Y REDUCCIÓN DEL pH

¿Porqué la sangre se centrifuga? Es posible transfundir la sangre a los pacientes como sangre total . Pero hay muchas buenas razones para transfundir solamente hemocomponentes Los componentes son transfundidos de acuerdo a la necesidad de los pacientes. Se evita la transferencia de sustancias innecesarias y perjudiciales  reducción de riesgo de reacciones transfusionales El almacenamiento de componentes individuales puede ser optimizada Hematiés: 2 a 6°C, Plaquetas: 20 a 24°C,Factores da coagulación y proteínas plasmáticas:  18°C La separación de la sangre nos da la posibilidad de usar una única donación para atender diversos pacientes

Centrifugación -principio VSEDIMENTACIÓN ~ r2 (dcélula -dplasma) n r = radio de la célula, n= viscosidad del medio y d =densidad FUERZA DE SEPARACIÓN DEL PLASMA PLAQUETA HEMATÍE GRANULOCITO VELOCIDAD DE SEDIMENTACION

El proceso de centrifugación Los componentes de la sangre pueden ser separados porque ellos difieren en tamaño y densidad. P T L E P T L E E L T P x g x g Buffy coat P = plasma; T = trombócitos; L = leucocitos; E = eritrócitos

Centrifugación Los problemas con las bolsas de sangre en las centrífugas resultan de su flexibilidad, del volumen y del manoseo de las bolsas satélites. Una serie de combinaciones de factores que influencian la centrifugación torna imposible contar con reglas generales. El tipo de centrífuga y sus accesorios Parámetros de centrifugación Tipo de bolsa de sangre Volumen de sangre Técnica de empaque en llos vasos de la centrifuga Balanceamiento

Arranjos na caçapa Diferentes radios en bolsas acomodadas en un vaso doble, a baja velocidad de centrifugación.  Bolsas quedan acomodadas en el medio y las bolsas satélites en la parte externa. Alta velocidad Baja velocidad

Balanceamiento de los vasos Una centrifugación suave depende del balanceamiento de peso en los vasos localizados en posición opuesta. Cuanto mayor es la diferencia, mayor es la vibración. La diferencia de peso no debe pasar más de 5 a 6 g. Número ímpar de bolsas  usar bolsas llenas de agua para contra-balancear. Es útil la pre-selección de bolsasde sangre en grupos de pesos similares. Usar laminados de bolsas que no fueron utilizadas como pesos.

Consejos para el empaquetado Las etiquetas deben ser colocadas contra las paredes del vaso. Los sellos de las bolsas no deben ser doblados hacia abajo, evitando así la apertura de la misma. Los sellos no deben estar situado en la parte inferior del vaso. Los tubos no deben exceder el límite del vaso, ya que se pueden romper. No se debe envolver los tubos alrededor de las bolsas debido a posibles derramamientos  , se los debe posicionar entre las bolsas.

Empaquetamiento – sistema de bolsa triple (1)

Empaquetamiento – sistema de bolsa triple (2)

Centrifugaçión pesada Centrifugaçión pesada para la preparación de plasma, buffy coat y hematíes: Aceleración: média Desaceleración: baja – media RCF: 2900 – 4000 xg Tiempo: 10 – 15 min Temperatura: + 22 °C 1a. Etapa en la preparación de plaquetas de buffy coat.

2a. Etapa en la preparación de plaquetas de buffy coat. Centrifugación leve Centrifugación leve para a preparación de plasma rico en plaquetas (PRP) Aceleración: media Desaceleración: baja RCF: 380 - 450 x g Tiempo: 5 - 10 min Temperatura: + 22 °C 2a. Etapa en la preparación de plaquetas de buffy coat.

Recomendaciones La centrifugación es un stress para todas las células. Por lo tanto, si es posible... ...es mejor tiempos de centrifugación más largos y menos fuerza de centrifugación. ...deje las plaquetas en reposo como mínimo una hora después de cada centrifugación. Cuanto más estable es el posicionamiento de las blosas en el vaso , mejor el resultado de sedimentación. Cuando el empaquetamiento es muy apretado puede causar turbulencias en la capa sedimentada al retirar las bolsas del vaso.

Sistemas para la preparación de hemocomponentes SANGRE TOTAL PARA METODO BC SANGRE TOTAL PARA METODO PRP CENTRIFUGACION LEVE PRP CH CENTRIFUGACION PESADA PPP CP POOL DE 4 - 6 CPs CH-BC BC INDIVIDUAL TAB CUADRUPLEa CENTRIFUGACION PESADA BC PPP CENTRIFUGACION LEVE CP BC residual CENTRIFUGACION PESADA TAB TRIPLE CH-BC BC PPP Pool 4 - 5 BC CENTRIFUGACION LEVE CP BC residual POOL BC PRP = plasma rico em plaquetas; CH = concentrado de hematies; CH-BC = conc. de hematies depletado de buffy-coat; BC = buffy-coat; CP = concentrado de plaquetas

Procesos de fraccionamiento Colecta Almacenamiento Acomodacion Separacion Centrifugacion

CALIDAD DE LOS C. PLAQUETAS Método Plasma extra (ml) Recuperação plaquetas (%) Plaquetas / unidade Leucócitos / quantidade de plaqueta PRP 60-75 > 5,5 x 1010 em 100% 1-2/1000 CP single BC 30 40-60 > 5,5 x 1010 em 75% 1-2/10.000 CP pool BC 75 > 2,5 x 1011 <1-2/100.000

CALIDAD DE LOS HEMATIES Método Volume (ml) Hematócrito (%) Leucócitos / unidade (% da contagem inicial) Validade PRP (tripla CPDA-1) 280  50 65 – 75 > 90% 35 dias Buffy-coat (tripla ou quádrupla TAB) 50 – 70 < 30% 42 dias

Los bancos de sangre de todo el mundo estan cada vez más empeñados en mejorar su eficiencia y calidad con la automatización total de sus procesos de producción y flujo de información.

Muchas gracias !