Espectroscopia de fluorescencia La espectroscopia de fluorescencia, también llamada espectrofotometría o fluometría; es un tipo de espectroscopia electromagnética, la cual analiza la fluorescencia de una muestra.

FLUORESCENCIA estado singulete excitado, transición permitida. 1er. paso: absorción o excitación energía suficiente para llegar a nivel electrónico superior. S1 o S2 λexc 2do. paso: emisión de luz energía radiactiva emitida menor que la absorbida. λem > λexc Corrimiento de Stokes

Parámetros a medir en fluorescencia • Intensidad de fluorescencia (ISS) • Espectros de excitación y emisión (IF vs λ) • λmax(ex), λmax(em) • Rendimiento cuántico de fluorescencia (Q) • Vida media del fluoróforo (τ) • Anisotropía (r) (tiempo de correlación rotacional) • Eficiencia RET (E) (distancia de Föster)

La absorción de radiación UV-Vis por una molécula conlleva a la formación de un estado electrónico excitado.

Obtención de el espectro de absorción Mida el espectro de absorción de la fluoresceına entre 250 y 650 nm.. Localice los máximos (longitud de onda e intensidades). Imprima el espectro

Obtención de el espectro de fluorescencia Haciendo uso del espectro de absorción defina los parámetros del espectro de fluo- rescencia de la fluoresceina. Para ello: Una buena aproximación es considerar que: a) El espectro de fluorescencia es la imagen especular del de absorción. b) El espectro de fluorescencia se corta con el de absorción a una λ con un valor de la absorbancia que corresponde a la mitad de la absorbancia del máximo.

Obtención de el espectro de excitación Haciendo uso de los espectros de absorcion y fluorescencia defina los parámetros del espectro de excitación. Solo nos interesa observar la banda mas importante. El espectro de excitacion´ aparece en el mismo intervalo que el de absorcion.

Luminiscencia de fosforescencia La fosforescencia es el fenómeno en el cual ciertas sustancias tienen la propiedad de absorber energía y almacenarla, para emitirla posteriormente en forma de radiación.

INSTRUMENTOS PARA LA MEDIDA DE LA FLUORESCENCIA Y LA FOSFORESCENCIA Los distintos componentes de los instrumentos para la medida de la fotoluminiscencia son similares a los que se encuentran en los fotómetros o espectrofotómetros ultravioleta/visible.

Introducción a la fosforimetria Los fenómenos de luminiscencia molecular son aquellos en los que tiene lugar una absorcion de energía por parte de la molécula y un proceso posterior de emisión de radiación electromagnética en el que intervienen.

Absorcion y emisión de luz a nivel molecular El estudio de la fosforimetria comienza en 1888, cuando wiedemann describe, por primera vez, una emisión fosforescente en disoluciones solidas de algunos colorantes orgánicos.

Influencia del entorno químico en la fosforescencia Efecto de la temperatura: Cuanto menor es la temperatura, el rendimiento cuántico de fosforescencia tiende a ser mayor como resultado de la restricción a las libertades vibracionales, rotaciones y difusionales.

Efecto del pH La influencia de la acidez y basicidad de una solución en el espectro de fosforescencia se deriva de la disociación de grupos funcionales ácidos o de la protonacion de grupos funcionales básicos.

Metodologías fosforescentes a temperatura ambiente En las escalas de tiempo relativas a muchos procesos fisico-quimicos que ocurren en la naturaleza, la fosforescencia tiene una vida media bastante larga lo cual permite que otros procesos compitan con ella para la desactivación del estado triplete excitado mas bajo.