Estructura y propiedades de los canales de iones

Presentación del tema: "Estructura y propiedades de los canales de iones"— Transcripción de la presentación:

1 Estructura y propiedades de los canales de iones
Esta presentación está disponible en Jueves 17 de junio:

2 Canales de iones dependientes de potencial eléctrico.
Artículos para el seminario del martes 22 de junio: DoyleEtal1998Science280_69.pdf JiangEtal2002Nature417_515.pdf JiangEtal2002Nature417_523.pdf JiangEtal2003Nature423_42.pdf JiangEtal2003Nature423_33.pdf LongEtal2005Science309_897.pdf LongEtal2005Science309_903.pdf LongEtal2007Nature450_376.pdf TaoEtal2010Science328_67.pdf Los archivos pdf están en

3 Axón de jibia Electrodo que inyecta corriente Vx(t)
Electrodos para medir el potencial Con este sistema podemos observar la propagación del impulso nervioso a lo largo del axón.

4 0.00 ms Estímulo en de 25 microamperes en x = 0. Dura 0,5 milisegundos y empieza a t = 0 milisegundo. Registro del potencial eléctrico intracelular a lo largo del nervio.

5 15.12 ms 10.76 ms 0.04 ms 4.60 ms 1.88 ms 0.52 ms 1.24 ms 8.84 ms 9.80 ms 8.04 ms 3.72 ms 0.12 ms 2.28 ms 2.92 ms 5.48 ms 6.44 ms

6 Voltage clamp Arreglo experimental para controlar el potencial eléctrico de la membrana. (voltage clamp) Vm 1x 105x Vcomando El potencial de la membrana es igual al potencial de comando en todos los puntos a lo largo del axón. El amplificador se encarga de pasar tanta corriente como sea necesario para mantener esta igualdad.

7 Voltage clamp Arreglo experimental para controlar el potencial eléctrico de la membrana. (voltage clamp) Vm 1x 105x Vcomando A El potencial de la membrana es igual al comando. El ampérmetro A mide la corriente que pasa por la membrana contenida en 1 cm lineal de axón.

8 Voltage clamp de un axón de jibia
Curso temporal de la corriente iónica bajo voltage clamp Voltage clamp de un axón de jibia Hodgkin y Huxley 1952 J. Physiol (London) 117: Latorre et al Biofísica y Fisiología Celular. Sevilla,1996

9 Curso temporal de la corriente iónica bajo voltage clamp
Voltage clamp de un axón de jibia en presencia de TTX, bloqueador de los canales de Na. La corriente que queda es la llevada por los canales de potasio

10 Curso temporal de la corriente iónica bajo voltage clamp
La corriente de llevada por los canales de sodio es la diferencia de la corriente total – corriente de potasio.

11 IK INa Im Vm IL IC Con voltage clamp:
Cm es la capacidad eléctrica e la membrana Gi es la conductancia de cada vía de paso y Vi es el potencial al cual la corriente de esta vía es cero

12 IK INa Im=0 Vm IL IC Sin voltage clamp: En reposo Vm = Vr y dV/dt = 0:

13 Curso temporal de las corrientes iónicas durante un potencial de acción de membrana
IK Iiones INa Vm

14 Im, (mAcm-2) Vm, (mV) Tiempo, (ms) Potencial de acción de membrana.
VNa Vm, (mV) Im, (mAcm-2) VL VK Tiempo, (ms)

15 Im, (mAcm-2) Vm, (mV) Tiempo, (ms) Potencial de acción de membrana.
VNa Vm, (mV) Im, (mAcm-2) VL VK Tiempo, (ms)

16 Im, (mAcm-2) Vm, (mV) Tiempo, (ms) Potencial de acción de membrana.
VNa Vm, (mV) Im, (mAcm-2) VL VK Tiempo, (ms)

17 Curso temporal de las conductancias durante un potencial de acción de membrana.
GNa GK

18 Para saber más sobre impulso nervioso consulte el libro de texto del Dr. Francisco Bezanilla:
The Nerve Impulse. This is a brief Textbook that covers the basics of the initiation and propagation of the nerve impulse using equivalent circuits with reference to ionic conductances. Voltage dependent conductances are explained on the basis of single channel properties. The text contains links to the simulation programs.

19 Los canales responsables del potencial de acción en el axón gigante de jibia tienen dos atributos importantes. Selectividad. Conducen Na+ o K+ en forma excluyente. Excitabilidad. Capacidad de cambiar su capacidad de conducir iones en función del voltaje.

20 Los canales responsables del potencial de acción en el axón gigante de jibia tienen dos atributos importantes. Selectividad. Conducen Na+ o K+ en forma excluyente. Excitabilidad. Capacidad de cambiar su capacidad de conducir iones en función del voltaje.

21 Movimiento en un medio viscoso
Velocidad = movilidad · fuerza (m s-1) La “fuerza” que impulsa el movimiento de los iones es el gradiante de potencial químico . En una sola dimensión: J mol-1m-1 N mol-1 movilidad = velocidad por unidad de fuerza ( ms-1 N-1mol) velocidad = movilidad · fuerza (m s-1)

22 Esta caja es un elemento de volumen de un sistema más grande
Esta caja es un elemento de volumen de un sistema más grande. En la caja hay moléculas que se están moviendo impulsadas por un gradiente de potencial químico. La velocidad de las moléculas es v ms-1 Todas las moléculas que están a una distancia vt atraviesan la pared de la izquierda en un tiempo t v A c vt El número de moles del soluto presente en la caja es igual a su concentración c multiplicada por el volumen de la caja. c A v t.

23 v A c vt Todas las moléculas que estaban en la caja a tiempo t han atravesado la pared al tiempo t + t. El número de moles del soluto presente que sale de la caja en un intervalo de tiempo t es c A v t. El número de moles que atraviesa cada unidad de área por unidad de tiempo se llama Flujo, J. mol m-2s-1

24 Para estudiar la selectividad de los canales compararemos los flujos de los iones medidos al aplicar la misma fuerza a todos. Los factores que gobiernan la selectividad son entonces la concentración y la movilidad.

25 Movilidades relativas a la del K en el agua
J = concentración • movilidad • fuerza Movilidades relativas a la del K en el agua En un poro acuoso las diferencias de movilidades entre Na y K son pequeñas Examinemos entonces las concentraciones R. A. Robinson and R. H. Stokes. Electrolyte solutions. 2ndedition Butterworths, London 1959.

26 C (membrana) C (solución)
¿Cuál es la concentración dentro de una membrana? Suponiendo que el flujo es pequeño, se puede usar el coeficiente de partición, b, para expresar la concentración en el borde de la membrana en función de la concentración en el seno de la solución. C (membrana) C (solución)

27 En el equilibrio ( J = 0 ) los potenciales químicos son iguales

28 Interacciones de los iones en agua y en un sitio en de un canal hipotético hecho de grupos carbonilo. En la solución las moléculas de agua se acomodan al tamaño del ion. Las interacciones son más fuertes para los iones más pequeños La posición de mínima energía para el ion en el canal es la equidistante de los grupos C=O. La energía de interacción en la membrana es igual para todos los iones Ver artículo de Armstrong en: Hille Armstrong MacKinnon 1999 NatureMedicine 5:

29 Estados de referencia: 1 mol por litro de ion en fase gaseosa Solución 1 molal de iones en agua
Los radios de los iones están en angstrom Grandes diferencias de coeficiente de partición entre fase acuosa y gaseosa. Robinson and Stokes “Electrolyte Solutions” Butterworths,London 1959.

30 Grandes diferencias de coeficiente de partición entre fase acuosa y gaseosa, implican grandes diferencias de coeficiente de partición entre fase acuosa y una membrana que no interactúe con los iones. Pregunta: ¿Cual será la selectividad de una membrana que interactúa por igual con todos los iones?

31 Por la energía de hidratación: la selectividad es Cs > Rb > K > Na > Li
¿Cuál será el ion preferido si se excluye el Cs y el Rb por tamaño?. El potasio ¿Cuál será el ion preferido si se excluye el Cs, Rb y K por tamaño?. El sodio Esta es una teoría elemental de la selectividad.

32 Estructura molecular

33 Topología de los canales de Ca2+, Na+ y K+ sugerida de sus perfiles
de hidrofobicidad x4 x4 x2 x2

34 Los canales pueden formarse a partir de una sola molécula de proteína, pueden ser
tetrámeros o dímeros

35 En los canales de K+ dependientes de potencial el segmento S4 y el poro (P)
están muy conservados Sensor de potencial Filtro de selectividad

36 KCsA, canal de dos segmentos de trasmembrana, cristalizado por MacKinnon en 1998
Doyle et al 1998 Science 280:69-77

37 KCsA de Streptomyces lividans
Tema de seminario martes 22 Doyle et al 1998 Science 280:69-77

38 KCsA de Streptomyces lividans
Doyle et al 1998 Science 280:69-77

39 KCsA de Streptomyces lividans
Doyle et al 1998 Science 280:69-77

40 Doyle et al 1998 Science 280:69-77

41 KCsA de Streptomyces lividans
Potasio coordinado con ocho grupos carbonilo en el filtro de selectividad. Potasio hidratado con ocho moléculas de agua en la cavidad del vestíbulo interno Zhou et al 2001 Nature 414:43-48

42 Estructura rígida que coordina perfectamente al ion potasio con ocho grupos carbonilo, igual que en el agua. Tiene un gran costo energético reacomodarlo para coordinar sodio Para el Seminario: Revisar la discusión sobre la importancia de la tirosina en determinar la selectividad de KCsA en Doyle et al 1998 Science 280:69-77

43 Selectividad. Conducen Na+ o K+ en forma excluyente.
Los canales responsables del potencial de acción en el axón gigante de jibia tienen dos atributos importantes. Selectividad. Conducen Na+ o K+ en forma excluyente. Excitabilidad. Capacidad de cambiar su capacidad de conducir iones en función del voltaje. Además de selectivo, el canal debe ser un buen conductor. ¿Cómo se puede ser muy selectivo y al mismo tiempo muy buen conductor?

44 ¿Cómo se puede ser muy selectivo y al mismo tiempo muy buen conductor?
+ El ion + es atraído por la carga negativa. - - + El ion + es atrapado por la carga negativa.

45 ¿Cómo se puede ser muy selectivo y al mismo tiempo muy buen conductor?
+ + El ion + se acerca a un par con carga neta cero - - + El ion + se aleja de un par con carga neta cero.

46 Ion K+ Molécula de H2O Morais-Cabral et al 2001 Nature 413:37-42

47 Un canal en que el agua y los iones se mueven en fila india
Potenciales de flujo Corrientes de flujo Un canal en que el agua y los iones se mueven en fila india Pongo igual concentración de potasio a ambos lados del canal Pongo igual potencial eléctrico a ambos lados del canal Que flujo neto de K se espera? Agrego un no electrolito a un lado del la membrana, Que flujo neto de K se espera? Esta es la corriente de flujo. A que potencial el flujo se hace cero? Este es el potencial de flujo.

48 Corriente de K a través de un canal de potasio en presencia de un gradiente osmótico.
Las concentraciones de K a ambos lados de la membrana son iguales por lo que el potencial de Nernst para el K es 0 mV.. El gradiente osmótico lleva el potencial de inversión de la corriente a 4 mV. El flujo de agua por los canales arrastra potasio. Hay entre 2 y 4 moléculas de agua en el canal. Su longitud es de 6 a 12 Ångström. Alcayaga et al 1989 Biophysical J. 55:

49 12Å 6 a 12 A Alcayaga et al 1989 Doyle et al 1998 Science 280:69-77

50 2-4 aguas/canal Alcayaga et al 1989
Morais-Cabral et al 2001 Nature 413:37-42

51 Los canales responsables del potencial de acción en el axón gigante de jibia tienen dos atributos importantes. Selectividad. Conducen Na+ o K+ en forma excluyente. Excitabilidad. Capacidad de cambiar su capacidad de conducir iones en función del voltaje.

52 Selectividad. Conducen Na+ o K+ en forma excluyente.
Los canales responsables del potencial de acción en el axón gigante de jibia tienen dos atributos importantes. Selectividad. Conducen Na+ o K+ en forma excluyente. Excitabilidad. Capacidad de cambiar su capacidad de conducir iones en función del voltaje. Un poco de historia: 1971 Moltemar, Chile

53

54 + + Tetra Etil Amonio TEA C9 CH3 CH3 CH2 CH2 CH3 CH2 N CH2 CH3 CH3 CH2
El TEA bloquea los canales de K con una cinética muy rápida C9 también bloquea pero su cinética es lenta.

55 Armstrong 1971 JGP 58:413

56 Control Armstrong 1971 JGP 58:413

57 +C9 Armstrong 1971 JGP 58:413

58 ++C9 Armstrong 1971 JGP 58:413

59 +++C9 Armstrong 1971 JGP 58:413

60 Armstrong 1971 JGP 59:413 También en: Hille Armstrong MacKinnon 1999 NatureMedicine 5:

61 Armstrong 1971 JGP 59:413 En: Hille Armstrong MacKinnon 1999 NatureMedicine 5:

62 Armstrong 1971 JGP 59:413 En: Hille Armstrong MacKinnon 1999 NatureMedicine 5:

63 Los canales de potasio tienen un filtro de selectividad en la entrada extracelular y una compuerta en la entrada intracelular. Hille Armstrong MacKinnon 1999 NatureMedicine 5:

64 Conclusiones 1971: El canal de K es un poro La compuerta está por dentro Hay un vestíbulo interno amplio capaz de alojar C9 Las paredes del vestíbulo son hidrófobas. Salto en el tiempo al siglo XXI

65 El canal de K es un poro En rojo se muestra el volumen accesible a una esfera del porte de una molécula de agua. Doyle et al 1998 Science 280:69-77

66 La compuerta está por dentro
Residuos accesibles sólo cuando el canal está abierto Residuos accesibles para el canal cerrado o abierto Doyle et al 1998 Science 280:69-77

67 Bicapa El cristal de KcsA corresponde a un canal cerrado
Las paredes del vestíbulo son hidrófobas. Bicapa Pero el vestíbulo es estrecho. No caben iones orgánicos grandes. El cristal de KcsA corresponde a un canal cerrado Doyle et al 1998 Science 280:69-77

68 El cristal de MthK corresponde a un canal abierto
El cristal de MthK presenta un vestíbulo interno amplio capaz de alojar C9 MthK KcsA El cristal de MthK corresponde a un canal abierto Methanobacterium thermoautotrophicum Jiang et al 2002 Nature 417:

69 Mecanismo de activación por ligandos intracelulares MthK, canal de potasio activado por calcio intracelular de Methanobacterium thermoautotrophicum. Jiang et al 2002 Nature 417:

70 La compuerta se abre por una flexión del segmento TM6 que tiene una bisagra formada por un residuo conservado glicina en algunos canales o por los residuos prolina-valina-prolina en otros canales. Mostrar animaciones Jiang et al 2002 Nature 417:

71 Movimiento hipotético del segmento S4 impulsado por las diferencias de potencial eléctrico.
Filtro de selectividad ( Na+, K+, Ca2+ ) V0 = 0 V0 = 0 + + + + Despolarizar Hiperpolarizar Vm = +60 mV Vm = -60 mV Compuerta abierta Compuerta cerrada

72 Identificación de las cargas del sensor de potencial

73 Un Condensador eléctrico consiste en dos placas conductoras separadas por un aislante.
Al cargar un condensador con una carga Q, se genera una diferencia de potencial eléctrico, V: Un condensador de una capacidad de 1 Farad adquiere una diferencia de potencial de 1 Volt al cargarlo con 1 Coulomb. La intensidad de una corriente eléctrica, I, se mide en Amperes. Una corriente de 1 Amper transporta 1 Coulomb por segundo. Un condensador de una capacidad de 1 Farad se demora un segundo al cargarlo con una corriente de 1 Amper.

74 Vacío entre las placas 1A 1A t = 1s, V = 1 Volt t = 0s, V = 0 Volts

75 1A t = 3s, V = 1 Volt 1A t = 0s, V = 0 Volts
Un diléctrico entre las placas 1A t = 3s, V = 1 Volt 1A t = 0s, V = 0 Volts

76 1A 1A t = 3s, V = 1 Volt t = 0s, V = 0 Volts
Un diléctrico entre las placas + + + + + + + + 1A 1A t = 3s, V = 1 Volt t = 0s, V = 0 Volts

77 Las cargas del dieléctrico se mueven en el campo eléctrico produciendo una corriente de desplazamiento: + + + + + + + + V = 1.0 Volt V = 1.0 Volt Las corriente de desplazamiento representa movimiento de cargas positivas desde el lado positivo hacia el lado negativo. Esta corriente transportó 2 coulomb . Representa la polarización del dieléctrico.

78 En el vacío la capacidad eléctrica es independiente del voltaje
1 coulomb 1 farad 1 coulomb 1 farad

79 Si hay cargas movibles entre las placas la capacidad eléctrica pude depender del voltaje.
+ 0 V + 1V + 1 coulomb 1 farad 5 coulomb 5 farad

80 Determinación de la carga necesaria para cambiar el potencial por integración de la corriente de carga. I I V V tiempo tiempo Salto de 0 a -1 volt Salto de 0 a +1 volt

81 Determinación de la carga necesaria para cambiar el potencial por integración de la corriente de carga. I Salto de 0 a +1 volt Salto de 0 a -1 volt V tiempo

82 Oocitos con Shaker Oocitos sin Shaker
Canal de potasio Shaker de Drosophila La corriente iónica está bloqueada por agitotoxina. AGTX Oocitos con Shaker Oocitos sin Shaker Aggarwal y MacKinnon Neuron 16:

83 Oocito de Xenopus expresado el canal Shaker de Drosophyla bloquados por AGTX
Con Shaker Sin Shaker Aggarwal y MacKinnon Neuron 16:

84 Q = 40 nC, pero ¿de cuántos canales?
Oocito de Xenopus expresado el canal Shaker de Drosophyla bloquados por AGTX Transición Carga desplazada Abiertos Cerrados Con Shaker Sin Shaker Q = 40 nC, pero ¿de cuántos canales? Aggarwal y MacKinnon Neuron 16:

85 Resulta 13.6 cargas por canal
El número de canales se determina con AGTX radiactiva de actividad específica conocida. Número de cargas elementales Número de canales Resulta 13.6 cargas por canal Aggarwal y MacKinnon Neuron 16:

86 Hay 7 cargas positivas en el posible sensor de potencial
Estructura primaria del producto de expresión de un gen que le falta al mutante Shaker de Drosophila. >shaker 1 MAAVAGLYGL GEDRQHRKKQ QQQQQHQKEQ LEQKEEQKKI AERKLQLREQ 50 51 QLQRNSLDGY GSLPKLSSQD EEGGAGHGFG GGPQHFEPIP HDHDFCERVV 100 101 INVSGLRFET QLRTLNQFPD TLLGDPARRL RYFDPLRNEY FFDRSRPSFD 150 151 AILYYYQSGG RLRRPVNVPL DVFSEEIKFY ELGDQAINKF REDEGFIKEE 200 201 ERPLPDNEKQ RKVWLLFEYP ESSQAARVVA IISVFVILLS IVIFCLETLP 250 251 EFKHYKVFNT TTNGTKIEED EVPDITDPFF LIETLCIIWF TFELTVRFLA 300 301 CPNKLNFCRD VMNVIDIIAI IPYFITLATV VAEEEDTLNL PKAPVSPQDK 350 351 SSNQAMSLAI LRVIRLVRVF RIFKLSRHSK GLQILGRTLK ASMRELGLLI 400 401 FFLFIGVVLF SSAVYFAEAG SENSFFKSIP DAFWWAVVTM TTVGYGDMTP 450 451 VGVWGKIVGS LCAIAGVLTI ALPVPVIVSN FNYFYHRETD QEEMQSQNFN 500 501 HVTSCPYLPG TLGQHMKKSS LSESSSDMMD LDDGVESTPG LTETHPGRSA 550 551 VAPFLGAQQQ QQQQPVASSL SMSIDKQLQH PLQHVTQTQL YQQQQQQQQQ 600 601 QQNGFKQQQQ QTQQQLQQQQ SHTINASAAA ATSGSGSSGL TMRHNNALAV 650 651 SIETDV Hay 7 cargas positivas en el posible sensor de potencial

87 = 3.9 cargas para R1 Aggarwal y MacKinnon Neuron 16:

88 = 3.9 cargas para R1 = 4.8 cargas para R2 suman 8.1 Aggarwal y MacKinnon Neuron 16:

89 = 3.9 cargas para R1 = 4.8 cargas para R2 suman 8.1 = 3.6 cargas para R3 suman 11.7 Aggarwal y MacKinnon Neuron 16:

90 = 3.9 cargas para R1 = 4.8 cargas para R2 suman 8.1 = 3.6 cargas para R3 suman 11.7 = 3.8 cargas para R14 suman 14.5 Aggarwal y MacKinnon Neuron 16:

91 = 3.9 cargas para R1 = 4.8 cargas para R2 suman 8.1 = 3.6 cargas para R3 suman 11.7 = 3.8 cargas para R4 suman 14.5 = 2.1 cargas para K5 suman 15.6 Aggarwal y MacKinnon Neuron 16:

92 = 3.9 cargas para R1 = 4.8 cargas para R2 suman 8.1 = 3.6 cargas para R3 suman 11.7 = 3.8 cargas para R4 suman 14.5 = 2.1 cargas para K5 suman 15.6 = 0.1 cargas para K7 suman 15.6 Aggarwal y MacKinnon Neuron 16:

93 Experimentos de reactivos de grupos SH
Experimentos de reactivos de grupos SH. MTSET CH3-S02-S-CH2-CH2-N+-(CH3)3 Hacer una mutación puntual, por ejemplo R326C Comparar la rapidez de la reacción de cisteína-MTSET para el canal abierto y el canal cerrado, poniendo MTSET ya sea por el interior o por el exterior.

94 Esquema resumen de la accesibilidad de los residuos del segmento S4
R1  R362 R2  R365 R3  R368 R4  R371 K5  K374 Larsson et al 1996 Neuron 16:

95 Estructura cristalina del canal de potasio activado por potencial eléctrico KvaP de Aeropyrum pernix.Vista desde el lado intracelular Fragmento de anticuerpo S4 Jiang et al 2003 Nature 423:33-41

96 Jiang et al 2003 Nature 423:33-41

97 La estructura cristalina difiere de la esperada.
Los segmentos de hélices alfa no están perpendiculares al plano de la membrana. El segmento S3 está dividido en dos segmentos S3a y S3b. El segmento S4 está fuera de la membrana. El segmento S6 está quebrado: el canal está abierto Esta estructura está distorsionada por la inmovilización del S3b-S4 por el Fab. Jiang et al 2003 Nature 423:33-41

98 Estructura cristalina del sensor de potencial aislado de KvAP
El sensor de potencial es un DOMINIO. Se puede sintetizar y pelgar separado del poro Esta estructura del sensor de potencial no está distorsionada y permanece vigente hasta hoy como modelo de sensor de potencial. Jiang et al 2003 Nature 423:33-41

99 Modelo Modelo de paddle o remo en que el sensor de potencial es periférico al poro se mueve en la bicapa de lípidos. . Cristal completo Modelo En este modelo es collage del cristal del el sensor de potencial y el cristal de KcsA para del poro cerrado y el MthK para el poro abierto. Se colocó el sensor de potencial en relación al poro moviendo mas imágenes como cuerpos rígidos. Fue muy criticado por el costo energético de mover cargas eléctricas en un medio apolar. Jiang et al 2003 Nature 423:42-48

100 Las cargas + están blindadas de la bicapa por un canalículo formado por el resto de la estructura. (gating pore) Las cargas + están metidas en la bicapa Jiang et al 2003 Nature 423:33-41

101 Evolución del modelo de paddle desde 2003 a 2010.
O cómo convergen lentamente los modelos “convencional” y “nuevo” del año 2003. Invitación a discutir esta evolución durante el seminario del próximo martes. Copias de los archivos pdf de los artículos mencionados en esta clase se encuentran en

102 Canal de potasio de mamífero Kv1.2
Este es un cristal de un canal de mamífero. Aquí aparecen bien separados los dominios del poro y del sensor de potencial. La estructura del sensor de potencial es la misma que en 2003, pero la posición con respecto al poro está impuesta por el cristal. Long et al Science :

103 Quimera del Canal Kv1. 2 con el sensor de potencial de Kv2
Quimera del Canal Kv1.2 con el sensor de potencial de Kv2.1 cristalizado con fosfolípidos y detergente Long et al Science :

104 El linker S4-S5 une los dominios sensor de potencial con el dominio del poro
Long et al Science :

105 Modelo 2007 Las cargas positivas en el sensor activo están estabilizadas por estar en contacto con agua o cabezas polares de los fosfolípidos o con residuos con carga negativa Las cargas positivas en el sensor en reposo están estabilizadas por estar en contacto con agua o residuos con carga negativa Long et al Science :

106 Modelo 2010 Aquí el sensor está activo, tal como se ve en el cristal. La lisina K5 está en el centro de transferencia de carga. En reposo la arginina R1 está en el sitio de transferencia de carga. Aparece un centro de transferenca de cargas formado por una fenil alanina y dos residuos con carga negativa: aspartato y glutamato Tao et al 2010 Science 328:67-73