Possible pathway for heterochromatin formation in Drosophila.

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1 Possible pathway for heterochromatin formation in Drosophila.
(The endogenous siRNA pathway is involved in heterochromatin formation in Drosophila. Fagegaltier et al., 2009) Possible pathway for heterochromatin formation in Drosophila. Initiation of silencing might occur by sequence-specific targeting of the RITS complex, although it is not clear whether this step is prior to or follows the exchange of H2A for H2Av in the nucleosome. This exchange triggers acetylation of H4 Lys 12, followed by deacetylation and methylation of H3 Lys 9. HP1 is then targeted to the methylated Lys 9 residue of histone H3, which recruits the Suv4-20 methyltransferase to trimethylate histone H4 at Lys 20. Swaminathan J et al. Genes Dev. 2005;19:65-76 ©2005 by Cold Spring Harbor Laboratory Press

2 TF polII RNA

3 (Octubre, 2012) (Nature Structural and Molecular Biology)

4

5 eyegone (eyg) y twin of eyegone (toe)
eyg y toe pertenecen a la familia de factores de transcripción Pax Miembros de la familia Pax gene existen también en vertebrados. Hay 9 genes Pax en humanos. Las proteinas PAX son factores de transcripción que unen ADN a través de sus dominios paired (PD) y homeodominio (HD). eyg y toe son los únicos genes pax con un dominio paired truncado y estructuralmente son homólogos al Pax6(5a). Son represores transcripcionales. June et al, 1998

6 Heterocromatina constitutiva: Centrómeros y telómeros
Heterocromatina facultativa: Regiones reguladoras Grewal and Elgin, 2007

7 eyg reprime a wg durante el desarrollo del ojo de Drosophila
Represión por reclutamiento de factores remodeladores de la cromatina Análisis de la estructura de la cromatina en la región reguladora de wg. Ensayo de sensibiIidad a DNAsaI

8 Ensayo de sensibilidad a DNAse I
Extracción del ADN +/- Tratamiento con DNAseI Lisis celular (digestión con proteasa k) Purification del ADN genómico Ensayo de PCR-cuantitativa

9 Análisis de la estructura de la cromatina.
HETEROCHROMATIN EUCHROMATIN Ct 0U Ct 50U DCt=Ct50U- Ct0U

10 Análisis de la estructura de la cromatina en la región reguladora de wg

11 Fenotipo embrionario de mutantes eyg