Técnicas de manipulación del genoma.. Pero,¿qué necesitaremos recordar?

Presentación del tema: "Técnicas de manipulación del genoma.. Pero,¿qué necesitaremos recordar?"— Transcripción de la presentación:

1 Técnicas de manipulación del genoma.

2 Pero,¿qué necesitaremos recordar?

3 Estructura de un gen PROMOTOR RNA(cDNA) Intrones Exones PROTEÍNA

4 Al azar Introducción de DNA exógeno en el genoma

5 GENOMA GEN TRANSGÉN

6 GEN Al azar TRANSGÉN Concatémeros Gen crucial Zonas metiladas

7 Muertecelular

8 Recombinaciónhomóloga Al azar Introducción de DNA exógeno en el genoma

9 GEN TRANSGÉN Recombinación homóloga Recombinación homóloga TRANSGÉN

10 Para poder realizar la recombinación homóloga son necesarias células en cultivo

11 ¿QUÉ es la Terapia génica? “Proceso por el cual un nuevo gen es introducido en células de un individuo para producir un efecto terapéutico.” DNA como medicamento o Curar con genes

12 ¿QUÉ es Gene Marking? “Proceso que utiliza técnicas comunes a la Terapia Génica pero sin buscar un efecto terapéutico.” Ej. Seguir la pista a determinadas células en el organismo.

13 “Suprimir función” “Añadir función” Terapia Génica

14 “Añadir función” Terapia Génica

15 Sustitución del gen deseado.Sustitución del gen deseado. Reparación de una mutación.Reparación de una mutación. Añadir un genAñadir un gen Añadir función

16 Recombinación homológa (sustitución o reparación puntual)Recombinación homológa (sustitución o reparación puntual) Introducción del transgen al azarIntroducción del transgen al azar (añadir un gen) (añadir un gen) Añadir función

17 “Suprimir función” Terapia Génica

18 Muerte celular (suicidio de las células)Muerte celular (suicidio de las células) Oligonucleótidos antisentido (expresión).Oligonucleótidos antisentido (expresión). Ribozimas (Ruptura).Ribozimas (Ruptura). Suprimir función

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20 OLIGONUCLEÓTIDOS ANTISENTIDO iRNA: RNA de interferencia

21 MODOS DE INTRODUCCIÓN

22 “Ex vivo” “In vivo” Terapia Génica

23 EX VIVO INDIRECTOS - Retrovirus -Adenovirus - Adenovirus asociados - Liposomas - Fragmentos específicos - Retrovirus -Adenovirus - Adenovirus asociados - Liposomas - Fragmentos específicos DIRECTOS QUIMICOS FISICOS Precipitación con fosfato de calcio Precipitación con fosfato de calcio Electroporación DNA desnudo IN VIVO/EX VIVO

24 David "niño burbuja", (Fuente: M.R. Cummings. Herencia humana (3ª ed.), Interamericana (1995)

25 Tratamientos - Aportación de la enzima recombinante: ADA PEG-ADA - Transplante de médula osea.

26 1ª Experiencia de Terapia génica: Deficiencia Inmune Severa Combinada - 1990. Dr Blaese (EEUU) Dr. Bordignon (Italia) -1995 Demuestran la eficacia del tratamiento

27 Ashanti de Silva tratada a los cuatro años de edad. (Fuentes: W.F. Anderson, Scient. Amer., 273(3):96-98(1995).

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29 X-SCI Imunodeficiencia Severa combinada -Mutación en el Cromosoma X - Deficiencia en la cadena  del receptor para la interleukina IL2RG - Hospital Necker de Paris (11 niños)

30 X-SCI Imunodeficiencia Severa combinada -3 de los niños sufrieron una leucemia. - ¿Por qué? -Efecto posición (LMO2)-2003 -Efecto sobreexpresión- 2006

31 Para saber que se está haciendo… Sociedad Europea de TG Sociedad Americana de TG

32 1. Estudios en investigación básica - Funcionamiento de genes - Funcionamiento promotores 2. Producción Animal - Incremento de productividad Cuantitativo Cualitativo - “Biotecnología de corral” 3. Sanidad - Animales modelos de enfermedades - Xenotrasplantes - Terapia Génica Germinal.

33 TRACY  s1-antitripsina humana  s1-antitripsina humana Promotor  -lactoglobulina ovina Promotor  -lactoglobulina ovina

34 Primeros ensayos en ratón: 4.3 Kb Promotor WAP de ratón 6.6 Kb de AAT-humano cDNA 12.5 gr./litro Obtienen microlitros de leche Volumen/año gr./año Producción vital 8 litros 400 litros 10.000 l. 0.04 Kg. 2 kg. 50 kg 1 Kg. 100 kg. toneladas Coneja Oveja Vaca

35 Roslin Institute-PPL Therapeutics (lo que sabemos......)  s1-antitripsina Fibrinógeno Factor VII y Proteína C Factor XI BSSL (lipasa) Anticuerpos humanizados

36 Organismos modelos

37 Ratón Especie de elección Metodología de creación puesta a punto. Corto intervalo generacional Numerosos descendientes. Especie de elección Metodología de creación puesta a punto. Corto intervalo generacional Numerosos descendientes.

38 ¿Pero, hay muchos modelos animales?

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40 Mouse Models for Human Disease

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