Presenta Elizabeth Sosa Castillo The EMBO Journal.

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1 Presenta Elizabeth Sosa Castillo The EMBO Journal

2 Introducción La interrupción de la doble cadena de ADN es un potente inductor de cambios perjudiciales del genoma y muerte celular. Origen de las roturas Radiación ionizante Agentes oxidantes Errores en la replicación Algunos productos derivados del metabolismo de la célula

3 MECANISMOS QUE EVITAN LA ROTURA DE LOS CROMOSOMAS Unión no homóloga de extremos Los extremos rotos se yuxtaponen y se ligan Generalmente supone la pérdida de uno o varios nucleótidos en el sitio de unión Mecanismo común en mamíferos

4 MECANISMOS QUE EVITAN LA ROTURA DE LOS CROMOSOMAS Unión homóloga de extremos (en células diploides) Se utiliza el otro cromosoma para reparar sin pérdida de nucleótidos Se utiliza un mecanismo relacionado con los procesos de recombinación de DNA Si el daño ocurre después de la replicación del DNA pero antes de la mitosis, puede utilizarse la cromátida hermana para proceder a la reparación Ocurre en humanos, pero es mucho más frecuente en Drosophila, Levaduras y en Bacterias

5 RESPUESTA AL DAÑO DEL ADN

6 Meiotic DSB repair in yeast Esta no es indipensable

7 Double-strand break repair in S. cerevisiae with hand-off of intermediates between Rad52 group proteins. Esta no es indipensable

8 DNA damage and replication block checkpoints in S. cerevisiae and the functions of checkpoint proteins.

9 DNA BREAKS AND THE CELL CYCLE: CHECKPOINTS AND CELL CYCLE ARREST

10 OBJETIVO  Describir un análisis cuantitativo del procesamiento de DSB en Saccharomyces cerevisiae.

11 Metodología Ensayo de inmunoblot y ensayo de autocinasa Rad53. Citometría de flujo y microscopia de fluorescencia. Extracción de AND y preparación para qPCR. Cuantificación por PCR tiempo real

12 ENSAYO PARA LA CUANTIFICACIÓN DEL SSDNA Y EXPERIMENTOS CONTROL

13 ANÁLISIS DEL PROCESAMIENTO DE DSB Y ACTIVACIÓN DEL PUNTO DE CONTROL (CHECKPOINT)

14 ANÁLISIS DEL PROCESAMIENTO DE DSB Y ACTIVACIÓN DEL PUNTO DE CONTROL (CHECKPOINT)

15 LA ACTIVACION DEL PUNTO DE CONTROL Y LA RESECCIÓN DE DBS SON PROCESOS DEPENDIENTES DE DOSIS

16 LA RESECCIÓN DE DSB ES REGULADA POR MECANISMOS DEPENDIENTES E INDEPENDIENTES DE NHEJ EN FASE G1

17 LA RESECCIÓN DE DSB ES REGULADA POR MECANISMOS DEPENDIENTES E INDEPENDIENTES DE NHEJ EN FASE G1

18 LA REPLICACIÓN DE ADN ES NECESARIA PARA LA ACTIVACIÓN EFICIENTE DEL CHECKPOINT Y LA ESTIMULACIÓN PARA EL PROCESAMIENTO DE DSB

19 EL INCREMENTO DE LA ACTIVACIÓN DEL CHECKPOINT POR DSBS DURANTE LA REPLICACIÓN ES DEPENDIENTE EN RAD9 PERO NO DE MRC1

20 Conclusiones