MACROMOLÉCULAS BIOMOLÉCULAS

Presentación del tema: "MACROMOLÉCULAS BIOMOLÉCULAS"— Transcripción de la presentación:

1 MACROMOLÉCULAS BIOMOLÉCULAS
Proteínas, ácidos nucleicos, carbohidratos y lípidos.

2 Enlaces La presencia de moléculas a base de C, N, O y H, permite que estas exhiban características químicas como los diferentes tipos de enlace o interacciones moleculares, que condicionan tanto las propiedades físicas, químicas, funcionales y estructurales. Estas características son el punto de partida para el estudio, análisis e identificación de las diferentes macromoléculas en el laboratorio.

3 SEPARACIÓN DE MACROMOLÉCULAS
Centrifugación Decantación (Tamaño molecular y diferente solubilidad)

4 CENTRIFUGACIÓN Una de las propiedades físicas de las macromoléculas es que por su alta densidad tienden a sedimentarse en medio acuoso, lo que permite que se formen diminutos gránulos. Esta característica física hace posible separar macromoléculas con alto peso molecular mediante la centrifugación.

5 DECANTACIÓN La decantación es un método físico de separación de mezclas especial para separar mezclas heterogéneas, estas pueden ser exclusivamente líquido - líquido ó sólido - líquido. La decantación se basa en la diferencia de densidad (física)|densidad entre los dos componentes, que hace que dejados en reposo, ambos se separen hasta situarse el más denso en la parte inferior del envase que los contiene. De esta forma, podemos vaciar el contenido por arriba.

6 Solubilidad Modificadas por: Cambios de pH Carga eléctrica Separadas
Sales solventes orgánicos Pruebas químicas específicas Separadas

7 OBJETIVOS Extraer y reconocer macromoléculas presentes en la célula de levadura Saccharomyces cerevisiae

8 DISCUSIÓN Maceración: Material abrasivo, arena.
Ácido tricloroacético: (cambios en el solvente – pH y carga eléctrica – acentúa la diferencia de solubilidad - precipitación) Decantación: (método de separación, diferencias de solubilidad) Centrifugación: Masa (tamaño molecular) y la densidad (determinada por su estructura). Esta separación se hace en orden ascendente de masa y densidad. Primero se purifica la de menor masa y densidad: Glucogéno.

9 DISCUSIÓN Después de sedimentar? Precipitado? Sobrenadante?
Glucógeno + etanol: Disminuir la constante dieléctrica? Constante dieléctrica del etanol oscila entre ¿Por qué el etanol frío? Por que se quiere evitar que la constante dieléctrica aumente con el aumento de la temperatura y a temperaturas bajas la energía cinética es menor y es más fácil precipitarla. Centrifugar Precipitado se le agrega LUGOL.

10 PURIFICACIÓN E IDENTIFICACIÓN DEL GLUCOGENO

11 MOLÉCULA DE GLUCOGENO

12 DISCUSIÓN Sedimento inicial: NaCl 10% calentamiento Centrifugación
Las proteínas se precipitan o muestran mínimo de solubilidad cuando su pH corresponde al pH isoeléctrico, al que la molécula no posee carga eléctrica?

13 DISCUSIÓN pH isoeléctrico:
La sal: Aporta aniones y cationes que producen la ionización de los grupos R disociables, equilibrando las cargas eléctricas, en estas condiciones no existe repulsión electrostática entre moléculas de proteínas vecinas y tienden aglomerarse y precipitar (Lehninger 1987).

14 Discusión Calentamiento: Contribuye con el proceso de precipitación, las proteínas pierden su estructura terciaria y secundaria, conservando intacta la primaria. El calor incrementa la cinética de las moléculas individuales, los enlaces que les confieren su ESTRUCTURA se rompen, haciéndolas más solubles, fenómeno conocido como DESNATURALIZACIÓN. (Lehninger 1987).

15 Discusión Después de la centrifugación: Sedimento de proteínas y un sobrenadante de ácidos nucleicos y solución de NaCl. Porqué no precipita primero el ADN que tiene mayor masa?

16 Discusión Los ácido nucleicos no se sedimenta, por que al desnaturalizarse no se rompen los enlaces covalentes entre el azúcar y la base nitrogenada, pero si se abre la estructura duplohelicoidal(Lehninger 1987).

17 Discusión Al sobrenadante con los ácidos nucleicos y la solución de NaCl se le agrega el etanol frío. Centrífuga Sedimento estén los ácidos nucleicos. Adiciona amortiguador salino pH 7: regule el pH y mantenga un estado iónico óptimo de las moléculas. Se adiciona reactivo de ORCINOL (reacción de color verde es positiva): ARN.

18 Prueba de orcinol o prueba de Bial

19 Discusión Sedimento de proteínas: se agrega una solución de NaCl para redisolverlas. Agrega NaOH y solución de sulfato cúprico: BIURET. La prueba de Biuret detecta la presencia de enlaces peptídicos y es positiva cuando están presentes dos o más.

20 Discusión El alcalí sirve para convertir el complejo en una solución de sodio soluble. El color se debe a la presencia de un complejo de coordinación con Cu+2 en el cual el enlace peptídico de las proteínas conduce al complejo estable en el cual se forman de dos a cinco miembros (Plummer, 1981)

21 BIURET

22 REACCIÓN DE BIURET Parte de cadena peptídica de proteínas
Complejo Purpura

23 BIBLIOGRAFIA Caicedo, L.D. Guía de Laboratorio de Bioquímica General1, Práctica de laboratorio 2. Macromoléculas. HICKS2, GOMEZ, J. J. Bioquímica. McGraw-Hill Interamericana, Mexico, Páginas: 264-7 Lehninger3. Páginas: MATHEWS4, C. K, VAN HOLDE, AHERN, K.G. Bioquímica. Tercera Edición, Prentice Hall, Madrid, Páginas , SKOOG, D, West D. Química Analítica. 4 ed, Mc Graw-Hill, Mexico, Páginas: 333. BROCK. Biología de los Microorganismos. 10ª Edición, Prentice Hall, Madrid, Paginas: 52.  Microsoft® Encarta® 2007 [DVD]. Microsoft Corporation, "Hongos.", “Levadura”, ”Hidratos de carbono”, “ARN”, ”Proteínas”, “Carbohidratos”, “Ácidos nucléicos”.

24 La estructura y la polaridad de la molécula de agua hacen que esta sea un disolvente capaz de reducir las fuerzas de atracción que existen entre partículas de cargas opuestas (o de reducir la repulsión entre partículas de cargas iguales). La constante dieléctrica no tiene unidades, pero es una medida de esa reducción y se define como: El punto isoeléctrico es el pH al que una sustancia anfótera tiene carga neta cero. El concepto es particularmente interesante en los aminoácidos y también en las proteínas. A este valor de pH la solubilidad de la sustancia es casi nula. Las moléculas complejas, tales como las proteínas, se combinan con los iones hidrógeno y con otros iones presentes en la disolución, dando lugar a la carga neta de la molécula. A la concentración de iones hidrógeno, o al pH, para el cual la concentración del ion híbrido de una proteína es máxima y el movimiento neto de las moléculas de soluto en un campo eléctrico es prácticamente nulo, se le denomina punto isoeléctrico.