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Estrategias alternativas de calibración para el laboratorio clínico: aplicación para la farmacovigilancia de la nortriptilina M.T. Olson, A. Breaud, R. Harlan, N. Emezienna, S. Schools, A.L. Yergey y W. Clarke Junio de 2013 © Copyright 2013 by the American Association for Clinical Chemistry
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Antecedentes El uso de LC-MS/MS es cada vez mayor en el laboratorio clínico El instrumento LC-MS/MS es costoso, por lo que generalmente un único instrumento debe usarse para múltiples ensayos cuantitativos Otros desafíos incluyen el rendimiento del ensayo y el cumplimiento de los objetivos de tiempo de obtención de algunos ensayos
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Antecedentes Un impulsor principal detrás del tiempo y el costo del ensayo LCMS/MS es la generación de una curva de calibración con cada serie del ensayo CLIA exige pruebas de linealidad en forma semestral La práctica de la medición de la línea de calibración con cada ensayo es única para la espectrometría de masas La práctica de la medición de la línea de calibración se originaba cuando los instrumentos eran menos estables que ahora
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Antecedentes La cuantificación de la espectrometría de masas trabaja en el “índice de respuesta”; el área de valor máximo para el analito dividida por el área de valor máximo para el estándar interno En el ejemplo a continuación, el área del analito equivale al doble del valor del estándar interno. La concentración del estándar interno es conocida, por lo que la concentración del analito equivale al doble del valor del estándar interno. En donde: Intensity= Intensidad Analyte= Analito Internal Standard= Estándar Interno
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Antecedentes En lugar de realizar una curva de calibración, los autores usaron el índice de respuesta Existe una corrección para las diferencias diarias, el “factor de respuesta” (RF) que es el índice de respuesta de una mezcla 1:1 analito:estándar interno El RF puede medirse con cada lote: RF contemporáneo o cRF Alternativamente, el RF puede medirse con errores de control de calidad o después de la manipulación del instrumento: RF esporádico o sRF
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ƒ es el factor de respuesta (RF)
Las ecuaciones ƒ es el factor de respuesta (RF) Este ensayo se ha realizado adecuadamente, no deberá existir intersección (k=0). Reorganización…
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Diseño experimental En donde: Patient Sample=Muestra del paciente Aliquot= Alícuota Extraction= Extracción Analysis= Análisis Result Calculation= Cálculo de resultados Cal. Curve Interpolation= Cal. de interpolación de curva Figura 1. Se midieron las concentraciones de nortriptilina en 68 pacientes durante 16 días por un periodo de 2 meses. Como dichas muestras se obtuvieron para farmacovigilancia clínica de rutina, se cumplió con el protocolo clínico estándar (cuadro sombreado). Se aplicaron los esquemas de cRF y sRF en cada muestra.
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Resultados: ¿Se realizó correctamente el ensayo. (es decir, ¿es k=0
Resultados: ¿Se realizó correctamente el ensayo? (es decir, ¿es k=0? ¿es ƒ=1?) Figura 2. La línea punteada azul que representa la curva de calibración con una concentración de estándar interno de 36 ng/ml muestra la mayor superposición con la línea continua. El mayor error proporcional y constante se observa con 6 ng/ml. (Chance=Posibilidad)
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Resultados: ¿Funciona esto?
El gráfico A muestra los resultados de pacientes con las cuatro concentraciones de estándar interno trazados en relación con los resultados de la curva de calibración La mayor coincidencia se observa con 36 ng/ml Bland-Altman (Gráfico B) muestra el sesgo de la media de 3.69 % para cRF en comparación con la curva de calibración con un rango de a 23.2 % Figura 3. La línea azul punteada que representa la curva de calibración con una concentración de estándar interno de 36 ng/ml muestra la mayor superposición con la línea continua. El mayor error proporcional y constante se observa con 6 ng/ml. Calibration curve= Curva de calibración; Mean= Media; Chance= Posibilidad
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Resultados: ¿Se observa un impacto clínico?
Tabla 1. Correlación de casos en los rangos de decisión clínica para los esquemas de calibración de cRF y sRF.a En donde: Calibration curve, ng/ml= Curva de calibración, ng/ml a Los valores de las celdas de texto en negrita indican acuerdo total entre la calibración alternativa y la estrategia de curva de calibración. El resto de los valores indican discordancia clínica relevante. Tabla 1. Si se hubieran usado los números de cRF, estos habrían dado lugar al informe de 3 concentraciones en diferentes categorías clínicas que las que se generaron con la curva de calibración en el protocolo existente. Si se hubieran usado los números sRF, se habrían generado 4 resultados en diferentes categorías clínicas.
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Análisis La medición de múltiples analitos con un único ensayo LC-MS/MS es una práctica común Se realiza para minimizar la calibración y el control de calidad Sin beneficio clínico en el contexto de los medicamentos recetados sin abuso potencial La multiplexación pone en riesgo la supresión iónica y el aumento de analitos coeluyentes La calibración de cRF o sRF puede reducir el tiempo destinado a la calibración de instrumentos y puede volver más factibles los ensayos de analito único
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Análisis Los ensayos LC-MS/MS funcionan mejor cuando la concentración de analitos se encuentra próxima a la concentración de estándar interno (A/IS ~ 1) Para los valores clínicos de este ensayo (principalmente en el rango de 100 a 150 ng/ml) la concentración de estándar interno ideal fue de 36 ng/ml Por tanto, la selección del estándar interno para un ensayo debería reflejar las concentraciones de analitos esperadas en los pacientes
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