PARTE II CAPÍTULO 12 METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE ELECTROFORESIS

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1 PARTE II CAPÍTULO 12 METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE ELECTROFORESIS
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2 corrimiento electroforético y visualización del gel.
Figura Elementos necesarios para una electroforesis. En la imagen se aprecian los elementos que se requieren para el corrimiento electroforético y visualización del gel. CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados. PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE

3 las muestras, de lo contrario las muestras se salen del gel.
Figura Cámaras de electroforesis. A) En las cámaras de electroforesis vertical el corrimiento de la muestra sigue la gravedad, ya que el polo positivo de encuentra en la parte inferior de la cámara. B) En la electroforesis horizontal debe cuidarse que el ánodo se coloque hacia el extremo del gel donde corren las muestras, de lo contrario las muestras se salen del gel. CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados. PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE

4 Figura 12-3. Preparación de un gel de agarosa
Figura Preparación de un gel de agarosa. La agarosa es un polvo que para disolverse requiere calentarse hasta la ebullición del solvente. Una vez obtenido el líquido de agarosa, antes de que se enfrié a menos de 50°C se coloca en una cámara para formar el gel. El gel se coloca de manera que los pocillos queden en el extremo donde se localiza en polo negativo de la cámara de electroforesis, para permitir que la muestra corra a lo largo del gel. CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados. PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE

5 del peso molecular de los fragmentos. La muestra se
Figura Electroforesis de ácidos nucleicos. Se representa un gel de agarosa en el cual se visualiza un marcador de peso molecular junto a las muestras para ayudar en la determinación del peso molecular de los fragmentos. La muestra se carga en los pocillos y se deja correr hacia el polo negativo. CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados. PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE

6 Figura 12-5. Perfil electroforético de un plásmido
Figura Perfil electroforético de un plásmido. Aunque la molécula de ADN (en este caso un plásmido) tenga la misma longitud en pb, puede demostrar diversos patrones de corrimiento electroforético según la conformación de la estructura. A) Plásmido superenrrollado. B) Plásmido circular. C) Plásmido linearizado. CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados. PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE

7 Figura 12-6. Electroforesis de proteínas
Figura Electroforesis de proteínas. Las proteínas se corren en geles de acrilamida formados por dos fases. Una fase superior donde las moléculas se concentran y una inferior donde la muestra se separa en sus componentes según su peso molecular. Al estar pretratadas con SDS, las proteínas se rodean de cargas negativas, lo que les permite migrar hacia el polo positivo con independencia de su carga inicial. CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados. PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE

8 Figura 12-7. Marcadores de peso molecular para ADN
Figura Marcadores de peso molecular para ADN. En la imagen el primer carril corresponde a las bandas que se obtienen de los fragmentos con un marcador como es el fago Phi X174 digerido por la enzima Hae III, mientras el segundo carril muestra los fragmentos de una escalera formada por segmentos sintéticos de ADN. CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados. PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE

9 Figura 12-8. Ejemplificación de electroforesis submarina
Figura Ejemplificación de electroforesis submarina. La muestra se coloca después de haber vertido el buffer de corrimiento y retirado el peine que sirve de molde para la formación de los pocillos. CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados. PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE

10 Figura 12-9. Electroforesis vertical
Figura Electroforesis vertical. En esta cámara se aprecia cómo el gel de acrilamida ha quedado embebido en buffer de corrimiento en su extremo superior gracias a la colocación de amortiguador en la parte interna de la cámara. El buffer de la parte externa permite que el polo positivo cuente con la misma solución buffer que transmita la corriente a la parte inferior del gel. CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados. PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE

11 encuentra en mayor cantidad y cuál en menor.
Figura Movilidad de fragmentos de ADN. La imagen muestra fragmentos de ADN de mayor a menor tamaño (parte superior hacia parte inferior) visualizados con un agente intercalante. Se aprecia cómo la intensidad de la banda observada es variable, lo que indica groso modo cuál fragmento se encuentra en mayor cantidad y cuál en menor. CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados. PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE

12 Figura 12-11. Fuente de poder. La imagen muestra una típica
fuente de poder donde se indica el miliamperaje a que está siendo corrida la muestra. La selección de las condiciones de corrimiento puede ser con un amperaje constante o bien a voltaje constante, como en este caso. CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados. PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE

13 A B Figura Visualización de fragmentos de ADN. Estas fotografías son de un gel de agarosa donde la muestra fue visualizada por A) bromuro de etidio, y B) Syber®-Green. CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados. PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE

14 Figura 12-13. CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS
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