Injinerutza genetikoa

Presentación del tema: "Injinerutza genetikoa"— Transcripción de la presentación:

1 Injinerutza genetikoa

2 ADNaren manipulazioan oinarritutako teknika- multzoa.
Adibide bat: Klonazioa Kopia berdin-berdinak lortzeko prozesua Oso eremu anitzetan aplikatu ADN zatiak, zelulak edo indibiduoak

3 Klonazio metodoaren faseak
ADN-zatiak lortzea ADN bektore bati lotzea (plasmidoa), birkonbinazio bidez Zelula hartzailean sartu ADN klonatua identifikatu

4 1. ADN-zatiak lortzea Errestrikzio-endonukleasak erabiliz
ADN-helize bikoitzetako fosfodiester loturak hautsi Errestrikzio-dianatik

5 Errestrikzio-dianak:
Kate bakoitzean posizio desberdinean kokatutako ebaketa eragin. Eco RI entzima Bi kateen puntu berean ebaki. Hae III errestrikzio-entzima

6

7

8 2. Lortutako zatiak plasmido bati lotzea
Plasmidoa aurrez aldetik hautatu Ezaugarriak: Errestrikzio-diana bakarra izatea Ez zelularen gainean eragin birulentorik sortaraz dezakeen generik Bi gene: bi antibiotiko desberdinekiko erresistentzia eman

9 Errestrikzio-entzima berak ebakitakoak izatea komeni
ADN-zatiaren + plasmidoaren arteko batura errazteko EcoRI: muturrak kohesiboak dira Hae III: kate sinple bat lotu, transferasa terminalaren bidez. Beste ADNan aurrekoaren kate osagarria sortu, ADN ligasak lotu

10 EcoRI

11 3. ADN brikonbinatzailea zelula hartzailean sartzea
3.1. Lortutako plasmidoa inkubatu Espezifikoki hautatutako bakterioekin 3.2. Plasmidoa bakterio-zelulei erantsi Baldintza egokietan

12 4. ADN klonatua identifikatzea
Baldintza egokietan egin arren, akatsak agertu daitezke: Plasmidoaren + klonatu beharreko ADNaren arteko loturan Plasmidoa bakterio-zeluletan egindako inkorporazioan

13 Kultiboan: Plasmidora inkorporatu diren zelulak ADN-zatia ez duen plasmidoa inkorporatu duten zelulak Plasmidoa inkorporatu ez duten zelulak Bakterio-koloniak bereizi + hautatzeko: antibiotikoetan oinarritutako tratamentuak aplikatu Plasmidoak erresistentzia ageri horiekiko

14