Tema 4. Transgénesis ¿Qué son los organismos transgénicos?. ¿Para qué sirven? Investigación Modelos de investigación de enfermedades humanas Biotecnología.

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1 Tema 4. Transgénesis ¿Qué son los organismos transgénicos?. ¿Para qué sirven? Investigación Modelos de investigación de enfermedades humanas Biotecnología Transformación genética. Transformación transitoria. Producción de bacterias, plantas y animales transgénicos. SB Primrose and RM Twyman. Principles of Gene Manipulation and Genomics 7th Edition.. Blackwell. pp 202-298

2 Tema 4. Transgénesis Métodos

3 Tema 4. Transgénesis Sistema celular: Oocitos Células en cultivo En plantas, Protoplastos/Células intactas-Bombardeo Material “transformante”: Plásmidos Microinyección de ARN Transformación transitoria

4 Maize transformation via particle gun with promoter - GUS fusions GUSpBETL9 L GUSpBETL9 Stable expression: 2 pos /10 (23 final expected) Transient expression Stable expression: 2 pos /8 (12 final expected) Fotografías Biogemma SAS

5 Tema 4. Transgénesis Bacterias Normalmente no se busca integración en el genoma, los plásmidos son perfectamente estables en condiciones de selección Levaduras Transformación no integrativa Transformación integrativa Integración al azar Por recombinación homóloga Transformación estable Vectores

6 Tema 4. Transgénesis Vectores de transformación en levaduras Bajo número de copias. Estable a través de mitosis y meiosis 50-100 copias por célula haploide, segregación inestable

7 Tema 4. Transgénesis Integración en el genoma de levadura

8 Tema 4. Transgénesis Plantas Agrobacterium Biolística In planta Animales Microinyección en pronucleos ES cells Transformación estable

9 Tema 4. Transgénesis Transformación estable en plantas, Agrobacterium Como la mayor parte de técnicas de transformación en plantas, implica el cultivo in vitro de tejido Se utilizan explantes de tejidos ricos en células indeterminadas: meristemos, semillas en desarrollo o germinación… Tras el cultivo se obtienen callos, en principio inmortales, pero genéticamente inestables Tras la transformación, se obtienen nuevas plantas mediante organogénesis o embriogénesis somática

10 Tema 4. Transgénesis

11 Transformación estable en plantas, Biolística

12 Tema 4. Transgénesis Transformación In planta. En Arabidopsis los métodos de infiltración en vacío y floral dip permiten obtner plantas transgénicas sin necesidad de cultivo “in vitro”. La técnica es posible porque una planta de Arabidopsis puede producir hasta 10000 diminutas semillas (selección “in vitro”) En otros organismos se ha ensallado la transformación de meristemos seguida de un mínimo paso por cultivo “in vitro”

13 Tema 4. Transgénesis Transformación estable en animales Al contrario que en plantas, en animales es necesario realizar la transformación en un tipo celular totipotente que vaya a dar lugar a línea germinal

14 Tema 4. Transgénesis ¿Análisis genético? La transformación de ES ilustra la necesidad de dominar las leyes de la genética para monitorizar la transmisión de estos caracteres

15 Tema 4. Transgénesis ¿Análisis genético? Siempre es necesario un análisis genético cuidadoso que permita asociar la presencia del transgén con el fenotipo correspondiente