VECTORES In ingeniería genética, un vector es un medio para transferir información genética entre organismos. Asegura la replicación (amplificación) y.

Presentación del tema: "VECTORES In ingeniería genética, un vector es un medio para transferir información genética entre organismos. Asegura la replicación (amplificación) y."— Transcripción de la presentación:

1 VECTORES In ingeniería genética, un vector es un medio para transferir información genética entre organismos. Asegura la replicación (amplificación) y aislamiento del fragmento clonado

2 Propiedades de un vector de clonamiento
Pequeño, pero suficientemente grande como para transportar el gen de interés en forma estable. Circular (cerrado) es menos susceptible a degradación. Marcador de selección Sitios únicos para ER Origen de replicación compatible con el huésped

3 Vectores bacterianos Plasmidios (clonar hasta 10 kb)
Bacteriófagos y derivados (clonar hasta 30 kb) Bacteriófago : DNA en la partícula viral es lineal, doble hebra, aprox 48 kb. Al infectar bacterias se circulariza. Cosmidios: plasmidio con extremos cos de  (hasta 45kb). Cromosoma Artificial de Bacteria (BAC), vector basado en un plasmidio de fertilidad F. Para clonar en bacterias, generalmente E. coli. Bajo número de copias, estable (clonar hasta pb)

4 Sistemas alternativos de vectores
Approximate maximum length of DNA that can be cloned into vectors Vector type Cloned DNA (kb) Plasmid 20 lambda phage 25 Cosmid 45 P1 phage* 100 BAC (bacterial artificial chromosome) 300 YAC (yeast artificial chromosome 1000

5 Dos vectores de bacterias famosos
Plasmidios artificiales, creados a partir de regiones de plasmidios naturales

6 Selección de clones recombinantes por inactivación de la resistencia a antibióticos
1. Clonamiento por inserción inactivante 2. Replica Plating para identificación de recombinantes

7 Selección de clones recombinantes por Test de complementación 

8 Para poder usar el sistema de selección por complementación alfa el genoma de la E. coli huésped debe contener el alelo delta M15lacZ. Resultados posibles

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10 Vectores  de inserción

11 Vectores  de reemplazo

12 Bacteriófago lambda como vector de clonamiento
Extracto con proteínas para empaquetar virus Concatémeros de  Virus completo, se usa para infectar bacterias huésped

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14 Cosmidios: Plasmidio con los extremos cos de : clonamiento de fragmentos de 35-45 kb

15 Cromosomas artificiales de bacterias: BACs
BACs son similares a plasmidios Contienen un Ori y los genes para las proteínas que se unen al origen, necesarias para replicación Son derivados de un gran plasmidio natural, el factor F Bajo nº de copias (1-2 copias/cel) Muy estables

16 Vectores de clonamiento en levaduras
Integran por recombinación con el genoma de la levadura. Una copia/genoma Vectores de clonamiento en levaduras Replicación episomal, autónoma. copias/genoma Replicación autónoma. Hasta 100 copias/genoma Se comportan como minicromosomas 1 copia/genoma

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18 YAC: cromosoma artificial de levadura