Cátedra de Biología Molecular Universidad del Salvador.

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1 Cátedra de Biología Molecular Universidad del Salvador.
Células Madre Cátedra de Biología Molecular Universidad del Salvador.

2 Trasplante de Celulas Madre Neurologicas. “SCN”
Enfermedad de Alzheimer Tratamiento Trasplante de Celulas Madre Neurologicas. “SCN” Pre- tratadas Factor neurotrópico derivado del cerebro “BDNF”

3 Tratado con SCN + FNDC Control AD+ Tratado con SCN -Sometieron para testear las condiciones en aprender y su habilidad de recuperar la memoria mediante un “laberinto de agua”.

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8 Materiales y métodos: Aislamiento y cultivo de celulas madre neurales (NSC) Ratones recién nacidos libres de antigeno especifico fueron alimentados

9 ¿Cómo se aislaron y cultivaron las NSC?
Se anestesiaron con una inyección hipodérmica de xilazina y ketamina Zona subventricular y el hipocampo (regiones con mayor actividad neurogénica) fueron separadas Los tejidos se trataron con papaína y mezcla ovomucoide a 37ºC durante 45 min La actividad de la papaína fue bloqueada agregando un volumen adicional de mezcla ovomucoide despues de la digestión

10 Luego el sedimento celular se centrifugo a 80 g durante 5 min
Se resuspendió y fue cultivado en el medio de neuroesfera estándar con L-glutamina, factor de crecimiento epidérmico de 20 ng/ml y suplemento B-27 a 37ºC durante 4 días. Las neuroesferas se pasaron con tripsina al 0,05 % seguida de trituración mecánica.

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12 Inmunohistoquímica los ratones de cada grupo fueron perfundidos con PBS seguido de 4% de PFA Los tejidos cerebrales se fijaron por en PFA durante 1-2 días y fueron tratados de forma secuencial con sacarosa del 15% al 30% crioseccionaron en muestras de 16 micrómetros

13 4) se bloqueó con BSA al 5% durante 1h y se lo lavó 3 veces con PBS
5) fue incubado con AC1 (anti NGFR p75) a 4°C durante la noche 6) se lo incubó con AC2 a 37°C durante 1h 7) se le agrego diaminobenzidina durante 5 min, y se lo observó al microscopio

14 Tinción de Acetilcolinesterasa(AChE)
1)Realización de 3 lavados de 1 minuto sobre el hipocampo con buffer de acetato 0,1 M 2)Incubación durante 30 min. con buffer de: -0,05% de yoduro de acetilamina -citrato de sodio 4 M -sulfato de cobre 3 M -ferricianuro de potasio 0,1 M -tampón de acetato 0,065 M

15 3) Lavado con una solución de: -Sulfuro de amonio al 1% x 3 minutos -Nitrato de sodio 0,1 M x 5 veces 4)Tinción con nitrato de plata x 2 min. 5) Selección azarosa de 5 fibras positivas para AChE en hipocampo CA1 para observación mediante microscopio

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17 Resultados