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Organización del material hereditario
Necesidad de compactación Volumen limitado Neutralización de cargas del ADN Organización funcional del ADN Mecanismos de segregación en duplicación Accesibilidad de proteínas reguladoras de la expresión génica
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El nucleoide bacteriano
El genoma bacteriano incluye un cromosoma circular y moléculas pequeñas circulares (plásmidos). No existe núcleo definido. ADN en “región nucleoide”. El genoma bacteriano incluye un cromosoma circular y moléculas pequeñas circulares (plásmidos) Varios dominios de Kb superenrollados asociado a ARN y proteínas
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El núcleo eucariota 10,000 nm El genoma nuclear humano comprende 46 moléculas de ADN lineales El largo sumado de este ADN es más de 1.5 metros El diámetro del núcleo es aprox. 10 nm
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El nucleo interfásico Cromatina complejo compuesto por ADN y proteínas
Eucromatina zonas menos condensadas Heterocromatina zonas más condensadas Toda la cromatina se condensa previamente a la división celular El núcleo eucariota (visión citológica) Porción de la célula fácilmente coloreable No homogénea
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Cuáles son los pasos de compactación?
El ciclo celular Durante la división se visualizan cromosomas individuales. Los cromosomas metafásicos son la forma más condensada de la cromatina. Los cromosomas son herramientas de segregación del material hereditario Cuáles son los pasos de compactación?
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La cromatina: microscopía
A partir de núcleos aislados se puede aislarse cromatina Al microscopio electrónico se observan fibras de 30 nm y collar de cuentas de 10 nm
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La cromatina: bioquímica
Análisis bioquímico Cantidades similares de ADN y proteínas Digestión de ADN con nucleasas repetidos de pb Proteínas básicas – HISTONAS
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Las histonas Proteínas básicas pequeñas Altamente conservadas
Centro globular y colas ricas en Lys y Arg Sitios de acetilación de Lys en colas N terminales (+) Sitios de fosforilación en Ser en colas de H1 H1 H2B H2A H3 H4 hélice variable conservado Histone Fold H2A/H2B Dimer “handshake”
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El octámero de histonas
Las histonas H2A y H2B forman un dímero. Dos H3 y dos H4 forman un tetrámero. Dos dímeros H2A-H2B y un tetrámero H3-H4 forman un octámero con forma de disco aplanado.
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El nucleosoma Sobre el octámero se enrolla el ADN.
Cada octámero organiza 145 pb en 1 ¾ vuelta. 48 nm ADN en un disco de 6x11nm. Sitios distantes en el ADN se aproximan (accesibilidad). Otros sitios quedan cubiertos (en la cara interna).
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Las colas de las histonas del core
Cargadas positivamente Pasan entre las vueltas de ADN Contactan con el ADN adyacente y del octámero próximo
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La histona H1 No forma parte del octámero
Organiza el ADN a la entrada y salida del octámero
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El solenoide Hélice nucleosomal 6 nucleosomas por vuelta
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Correlación Estructura-Función
La modificación de histonas es VITAL en la expresión génica. La acetilación y desacetilación de histonas es cíclica. Colas cargadas + Se unen al ADN de nucleosomes adyacentes Colas acetiladas NO se unen al ADN Bajo nivel de histona H1 Alto nivel de histona H1 Existe transcripción génica NO es posible la transcripción Fibra de 30 nm Cuentas 10 nm
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Proteínas no histonas en la cromatina
Eliminación de histonas (Tratamiento con detergentes leves o altas concentraciones salinas) Matriz nuclear proteica y bucles de ADN unidos a la matriz DNA loops Matriz nuclear + 2M NaCl histonas
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El andamiaje (scaffold)
Igual tratamiento en cromosomas metafásicos revela un esqueleto proteico del cromosoma (scaffold) del que salen bucles de ADN de 30 a 100 Kb. La matriz nuclear proteica es el scaffold durante la interfase.
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Bucles de cromatina Existen regiones de ADN que se unen al scaffold:
SARs (scaffold attachment regions) MARs (matrix attachment regions) SARs=MARs Loops of 30 – 90 kb
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Bucles como dominios de cromatina
Cada bucle fijado al scaffold puede presentar una estructura diferente, mas o menos condensada. Pueden ser dominios funcionalmente independientes.
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Dominios condensados Los bucles de ADN fijados al scaffold se pliegan formando una superhélice radial loop chrosomosome model cromátidas Cromosoma mitótico 10 mm 1mm cromátida
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El cromosoma metafásico
Forma de máxima compactación de la cromatina Unidad estructural segregacional de la información hereditaria Constricción secundaria Región organizadora nucleolar Con genes ribosomales Centrómero Constricción primaria Sitio de unión de proteínas que forman cinetocoro Brazos Porciones del cromosoma entre el centrómero y el telómero
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El cromosoma Unidad funcional de la información hereditaria Telómeros
Regiones terminales de los cromosomas Secuencias repetidas particulares Mecanismo de duplicación particular Función = Integridad cromosómica Orígenes de replicación ARS (sec. de replicación autónomas) Varios por cromosoma Función = replicación Centrómero Constricción primaria Rico en secuencias repetidas Sitio de unión de proteínas que forman cinetocoro Función = segregación
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Citogenética: técnicas de estudio de los cromosomas
La CITOGENETICA analiza la cantidad y morfología de los cromosomas. Los cromosomas se pueden describir en base a la posición del centromero. Bandeo cromosómico: Tratamiento desnaturalizante o enzimático del cromosoma y posterior tinción. Cada cromosoma revela un patrón específico de bandas claras y oscuras.
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Técnicas de bandeo cromosómico
Revelan diferencias estructurales en la cromatina que constituye cada banda. Tratamiento desnaturalizante o enzimático y tinción Bandas oscuras y claras (1-10 Mb) Bandeo G tratamiento con tripsina Bandas claras zonas activas replicación temprana Bandas oscuras zonas inactivas replicación tardía Bandeo R patrón opuesto a Bandeo G Bandeo C heterocromatina constitutiva pericentromérica
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Técnicas de localización cromosómicas
FISH Hibridación in situ sobre cromosomas con sondas fluorescentes Cariotipo Espectral Múltiple FISH con sondas específicas de cada cromosoma marcadas con un fluorocromo diferente.
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Niveles de compactación
Compactación debida al scaffold / matriz nuclear Compactación debida a histonas
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Correlación estructura-función
Compactación Neutralización de cargas del ADN mecanismos de segrega- ción en duplicación Represor transcripcional Dominios topológicos independientes ( Regulación independiente) Problemas Que sucede durante la duplicación y la transcripción?
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