INSTITUTO UNIVERSITARIO DE CIENCIAS DE LA SALUD FUNDACIÓN HÉCTOR A

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1 INSTITUTO UNIVERSITARIO DE CIENCIAS DE LA SALUD FUNDACIÓN HÉCTOR A
INSTITUTO UNIVERSITARIO DE CIENCIAS DE LA SALUD FUNDACIÓN HÉCTOR A. BARCELÓ CARRERA DE TÉCNICOS EN ANÁLISIS CLINICOS ANÁLISIS CLÍNICOS II: ETAPA ANALÍTICA Clase 6: Enzimología Clínica Dr. Enrique Martins

2 Enzimas Son proteínas que catalizan reacciones químicas.
Tienen una alta especificidad por su sustrato. Se pueden usar como reactivos. Están presentes en cantidades mínimas. Estructura primaria, secundaria y terciaria. Desnaturalización. Dr. Enrique Martins

3 Factores que afectan la actividad enzimática en plasma
Aumento de la actividad plasmática: - muerte celular - renovación celular - liberación sin muerte celular - disminución del aclaramiento del plasma Dr. Enrique Martins

4 Factores que afectan la actividad enzimática en plasma II
Dinámica de aparición y desaparición de las enzimas en plasma: - localización celular - tamaño de la enzima - extensión del daño tisular - grado de irrigación del tejido dañado - tasa de eliminación del plasma Dr. Enrique Martins

5 Cinética Enzimática E + S E-S E + P V = Vmax x S , Vmax= K x Etotal
Km +S Dr. Enrique Martins

6 Cinética Enzimática II
Dr. Enrique Martins

7 Cinética Enzimática III
Dr. Enrique Martins

8 Moduladores de la actividad enzimática
Activadores e inhibidores Inhibición competitiva Inhibición no competitiva Inhibición acompetitiva Efectos cinéticos Dr. Enrique Martins

9 Medida de la Actividad Enzimática
Aparición de producto vs desaparición de sustrato. Reacciones acopladas. Método de punto final. Método cinético. Unidades: UI, katal. Estandarización. Dr. Enrique Martins

10 Factores que afectan la velocidad de reacción
Enzima Sustrato Inhibidores Activadores Temperatura pH Fuerza iónica Concentración de proteínas Interferencias Dr. Enrique Martins

11 Biomarcadores Enzimas como marcadores de daño celular.
Mecanismos de injuria: - física - química - patológica - agentes infecciosos - reacciones inmunológicas - aumento del recambio celular Biomarcador ideal Dr. Enrique Martins

12 Enzimas Hepáticas “Hepatograma” Bilirrubina total y directa. (BT, BD)
Transaminasas ( AST, ALT) Fosfatasa alcalina (FAL) Gama-glutamil transferasa (GGT) Concentración de protrombina (CP) Proteínas totales Albúmina Colesterol Eritrosedimentación (ERS) Dr. Enrique Martins

13 Transaminasas Ampliamente distribuidas por el cuerpo.
Ambas se encuentran en el citoplasma. AST tiene una isoenzima mitocondrial. Cofactor: P-5’-P Rango de referencia: - AST: Hombre: hasta 38 UI/L Mujer: hasta 32 UI/L - ALT: Hombre: hasta 41 UI/L Mujer: hasta 31 UI/L Dr. Enrique Martins

14 Transaminasas II Variables preanalíticas Aumentan con el ejercicio
Disminuyen en falla renal Disminución por unión de P-5’-P a proteínas plasmáticas Hemólisis Dr. Enrique Martins

15 Transaminasas III Reacción cinética acoplada. NADH es el producto final del conjunto de reacciones. Se mide en UV. Reacción colorimétrica de PF de Reitman y Frankel. Estandarización deficiente. Estabilidad de las muestras: 12 a 24 hs. Conservación: - AST: refrigerada, congelada. - ALT: refrigerada, nunca congelada. Dr. Enrique Martins

16 Resultados Anormales Daño de los hepatocitos:
- hepatitis aguda o crónica - colestasis intra o extrahepática - alcoholismo, cirrosis Daño muscular: AST aumenta más que ALT AST puede aumentar en tumores malignos. AST y ALT pueden tener valores bajos en falla renal Dr. Enrique Martins

17 ↑ ↑ ↑ ↑ ↑ ↑ ↓ ↑ ↑ ↑ ↑ FAL GGT 5’-Nu AST ALT ALB N N,↑ Hepatitis aguda
Hepatitis alcohólica N,↑ Hepatitis crónica ↓ Cirrosis Sme. de Reye Hepatomas ↑ ↑ ↑ ↑ Colestasis

18 Fosfatasa Alcalina Isoenzimas más importantes en: hígado, riñón y hueso. Codificadas por el mismo gen. Otras: placentaria, intestinal, cel. germinales. Unida a membranas celulares. La FAL hepática se encuentra en la membrana de las células de los canalículos biliares Dr. Enrique Martins

19 Fosfatasa Alcalina II Rango de referencia depende de la edad:
- Adultos: 65 – 300 UI/L - Niños y adolescentes: hasta 645 UI/L Variables preanalíticas, FAL aumenta con: - BMI alto - Antiepilépticos - Tabaquismo FAL disminuye con: Anticonceptivos orales Transfusiones Hipolipemiantes Dr. Enrique Martins

20 Fosfatasa Alcalina III
Reacción cinética colorimétrica, el producto coloreado es p-nitrofenol. Muestra: sangre sin anticoagulante, ya que quela el zinc y el magnesio, necesarios para la actividad de FAL. Separación de las isoenzimas: Inhibición Fraccionamiento por calor Electroforesis Inmunoensayos Dr. Enrique Martins

21 Resultados Anormales Enfermedades de hígado y hueso.
En colestasis se produce una elevación mayor que en los trastornos hepatocelulares. Enfermedad de Paget, osteosarcoma, tumores metastáticos en hueso, y enfermedades metabólicas del hueso. Diabetes, fallo renal, cirrosis, hospitalización prolongada (FAL intestinal). Tumores malignos (FAL placentaria). FAL disminuida en deficiencia de zinc. Dr. Enrique Martins

22 Gama Glutamil Transferasa
Transferencia del grupo γ-glutamilo. GGT está en membrana plasmática de células con gran capacidad de secreción o absorción. La principal isoenzima en plasma es la hepática. Reacción cinética colorimétrica, el producto coloreado es p-nitroanilina. Rango de referencia: Hombre: 11 – 50 UI/L Mujer: 7 – 32 UI/L Dr. Enrique Martins

23 Gama Glutamil Transferasa II
Variables Preanalíticas - GGT aumenta con: BMI alto Tabaquismo Etanol, fenitoína, barbitúricos, carbamacepinas y el ácido valproico - GGT disminuye con: Después de las comidas (aumenta un tiempo después). Embarazo Anticonceptivos orales Dr. Enrique Martins

24 Resultados Anormales Aumenta en daño hepático:
- Hepatitis alcohólica - Cirrosis - Tumor metastático de hígado - Colestasis intrahepática - Obstrucción extrahepática - Hepatitis crónica - Cáncer hepático primario Baja especificidad para daño hepático: se utiliza junto con FAL y 5’Un. Dr. Enrique Martins

25 Colinesterasa La enzima presente en suero se sintetiza en hígado.
No se conoce su función. Rangos de referencia: Niños, hombres y mujeres de más de 40 años: – UI/L Mujeres entre 16 y 39 años: – UI/L Mujeres embarazadas y con anticonceptivos orales: – UI/L Reacción cinética colorimétrica. Dr. Enrique Martins

26 Resultados Anormales Disminuye en pacientes expuestos a inhibidores de la Colinesterasa. Colinesterasa de hígado refleja la función de síntesis más que el daño a los hepatocitos. Disminuye en hepatitis aguda y en cirrosis. Disminuye con la malnutrición. Utilidad limitada para monitorizar el daño hepático. Dr. Enrique Martins

27 5’-Nucleotidasa Es una fosfatasa, su sustrato son los nucleótidos.
Ampliamente distribuida por el cuerpo. Unida a membranas celulares. Rango de referencia: - Hasta 15 UI/L Aumenta levemente en embarazo. Medida: difícil, se debe diferenciar la actividad fosfatasa de 5’-Nu de la de FAL. Dr. Enrique Martins

28 Resultados Anormales Utilidad similar a la de GGT.
5’-Nu se encuentra aumentada en: - Colestasis. - Hepatitis aguda, aumento leve. - Carcinoma ovárico. - Artritis reumatoidea. Dr. Enrique Martins

29 Enzimas Cardíacas Biomarcadores de daño cardíaco: - Mioglobina
- Troponinas - CK - LDH - AST - Otros marcadores: BNP, PCR,… Dr. Enrique Martins

30 Diagnóstico de IAM Elevación típica de biomarcadores de necrosis miocárdica sumada a al menos uno de los siguientes: Síntomas isquémicos Ondas Q en el ECG Alteración típica del ECG indicadora de isquemia Intervención de arterias coronarias Dr. Enrique Martins

31 Dr. Enrique Martins

32 Creatina Kinasa Contribuye al almacenamiento de energía en el músculo.
Necesita magnesio como cofactor. Predominio de isoenzimas: MM: músculo esquelético y cardíaco. MB: corazón. BB: cerebro y músculo liso (casi no contribuye a la actividad en plasma). Rango de referencia: CK, Hombre: 24 – 195 UI/L; Mujer: 24 – 170 UI/L CK-MB: hasta 25 UI/L Dr. Enrique Martins

33 Creatina Kinasa II Variables Preanalíticas, CK aumenta con:
Ejercicio de fuerza o intenso. Daño muscular de cualquier clase. Embarazo ( a expensas de CK-BB placentaria). Macro-CK. Disminuye con: Inactividad Dr. Enrique Martins

34 Creatina Kinasa III Reacción cinética acoplada. NADH es el producto final del conjunto de reacciones. Se mide en UV. Se debe inhibir la adenilato kinasa. Métodos para separar las isoenzimas: Electroforesis Ensayos de inmunoihnibición Inmunoensayo de masa Dr. Enrique Martins

35 Resultados Anormales La causa más importante de aumento de CK es el daño cardíaco o de músculo esquelético. CK-MB aumenta en miopatías crónicas y en el fallo renal crónico. CK-MB puede aumentar en esfuerzo respiratorio persistente. CK-BB aumenta en daño del músculo liso. CK-BB puede aumentar en tumores malignos Dr. Enrique Martins

36 Lactato Deshidrogenasa
Forma parte de la ruta glucolítica. Distribuida por todo el cuerpo. Contiene zinc. Tetrámero, dos tipos de subunidades: H y M. Cinco isoenzimas Rango de referencia: - 230 – 460 UI/L Dr. Enrique Martins

37 Lactato Deshidrogenasa II
Variables preanalíticas, LDH aumenta en: Hemólisis Contacto con coágulos Agitación mecánica Ejercicio Luego de una transfusión sanguínea Medida: - Reacción cinética. Se mide el producto: NADH, en el UV, 340 nm. Dr. Enrique Martins

38 Resultados Anormales Los resultados anormales no son específicos de daño en ningún órgano en particular. LDH alta con AST, ALT y CK normales sugieren daño en células bioquímicamente simples. Daño cardíaco o de M.E.: aumenta LDH y CK, con aumentos mayores de AST. LDH casi no aumenta en daño hepático. Aumenta en daño multiorgánico. Aumenta en anemia megaloblástica, anemia hemolítica y cáncer hematológico. Dr. Enrique Martins

39 Enzimas Pancreáticas El diagnóstico presuntivo de pancreatitis se hace, ante la sospecha clínica, con el dato de amilasa y/o lipasa elevadas. Amilasa y lipasa pueden tener origen en otros órganos o tejidos. Es poco frecuente que se haga la detección de isoenzimas pancreáticas. La interpretación de amilasa sérica total está dificultada por la isoenzima salival y por la presencia de macroamilasas. Dr. Enrique Martins

40 Amilasa La amilasa sérica y la urinaria son, principalmente, de origen pancreático y salival. El calcio es necesario para su actividad. Macroamilasas. Se puede medir en suero y en orina. No medir en muestras anticoaguladas. Evitar contaminación con saliva. Fraccionamiento de isoenzimas. Dr. Enrique Martins

41 Resultados Anormales Amilasa aumenta en sangre y en orina en la pancreatitis aguda. Su valor no tiene correlación con la gravedad de la enfermedad. Es importante la determinación seriada. Depuración de amilasa como herramienta diagnóstica. Puede aumentar en pacientes con cáncer de hígado. Puede aumentar en cetoacidosis diabética. Se puede evaluar amilasa en líquido ascítico. Dr. Enrique Martins

42 Lipasa El páncreas es la fuente principal de la lipasa sérica.
Para su actividad catalítica completa necesita colipasa y sales biliares. La lipasa también está presente en hígado, estómago, intestino, leucocitos, adipositos y leche. Necesita calcio para su actividad, pero a altas concentraciones tiene efectos inhibidores. Es inhibida por metales pesados y quinina. No se encuentra en orina. Determinación: método turbidimétrico. Dr. Enrique Martins

43 Resultados Anormales Aumenta en la pancreatitis aguda, es más específica que amilasa. También aumenta en: Pancreatitis crónica Cáncer de páncreas Cirrosis hepática (sin pancreatitis) Otras. Dr. Enrique Martins