E.A.P: Microbiologia y Parasitologia

Presentación del tema: "E.A.P: Microbiologia y Parasitologia"— Transcripción de la presentación:

1 E.A.P: Microbiologia y Parasitologia
Influencia del pH y la temperatura en la producción de biomasa y esporas de Beauveria sp PR–11 aislada del departamento de Ayacucho

2 Integrantes Mallqui Crispin, Yesenia Cañari Limaymanta, Denis Elvis
Rivas Ayala, Lizeth Asesor: Ph.D. Castellanos Sánchez, Pedro Luis

3 Introducción Los hongos entomopatógenos han jugado un papel importante en la historia del control microbiológico y ha sido utilizado exitosamente para controlar plagas de muchas regiones del mundo. Su factibilidad de reproducción en forma controlada y la rentabilidad de su uso, representa una alternativa viable de estos hongos al ser utilizados sin perjuicios al ambiente y sin efectos tóxicos.

4 Introducción La cepa PR-11 del Género Beauveria aislada de Schistocerca piceifroms peruviana (Lynch Arribalzaga, 1903), nativo del departamento de Ayacucho, fue aislada y seleccionada para el control de plagas y vectores en nuestro laboratorio.

5 Para el uso de un hongo entomopatógeno como bioinsecticida, debe producirse en condiciones controladas esporas a concentraciones altas. Para lo cual es importante conocer los parametros fermentativos de producción óptimos: pH formación de micelio y esporas Temperatura agitación humedad

6 OBJETIVOS Determinar la temperatura óptima para la producción de biomasa y esporas. Evaluar diferentes niveles de pH óptimos para la mayor producción de biomasa y formación de esporas de Beauveria sp PR-11. Determinar la dinámica de producción en el tiempo de la biomasa y esporas.

7 Metodologia Se emplearón dos métodos fermentativos:
En estado sólido para la producción de esporas. En estado líquido en condiciones estáticas para la producción de biomasa. Se determinó el número de esporas y la producción de biomasa a los 5, 10, 15 y 21 días de incubación, con tres repeticiones cada uno.

8 Metodologia Las esporas del hongo se utilizaron como inóculo en frascos con medio agar papa glucosa (APD) en plano inclinado y se incubaron hasta por 21 días a temperatura del laboratorio. Luego las esporas fueron dispersadas en una solución acuosa con Tween al 1% para su posterior inoculación.

9 Evaluación del ph Se utilizó medio Czapeck con glucosa como única fuente de carbono, a niveles de pH de: 4.0, 4.3, 4.4, 4.6, 5.0 y 5.6, con tres repeticiones cada uno. 1 mL del inóculo madre de esporas se adicionó a cada juego de frascos erlenmeyer para cada nivel de pH . Se sembró por estriado en los viales con agar Czapeck a diferentes pHs y se incuba a 21 días a temperatura de laboratorio => Fermentación en sustrato sólido.

10 El hongo fue sometido a estudios de fermentación sumergida durante 21 días en agitador orbital Gemmy VRN-480 a 180 rpm, en medio Czapeck. => Para favorecer el aumento de la biomasa.

11 Evaluación de la temperatura
Se inóculo 200 uL de la solución acuosa con tween conteniendo los conidios en el medio czapeck con glucosa como única fuente de carbono a pH 4,4. Se evaluó la producción de esporas en 20, 27 y 30 ºC, con 3 repeticiones.

12 Se utilizó 0.1 mL de inóculo inicial en frascos erlenmeyer con medio czapeck a pH 4,5.
Se evaluaron las siguientes temperaturas: 20, 27 y 30 ºC, con 3 repeticiones por cada una, y se determinó la producción a los 5, 10, 15 y 21 días en condiciones estáticas.

13 DETERMINACIÓN DEL Nº DE ESPORAS
La producción de esporas en el experimento se calculó mediante conteo en la cámara de Neubauer, usando una solución acuosa de Tween al 1%, para dispersar las esporas. Esto se repetió cada 5 días durante los 21 días de incubación.

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15 Cálculo de Esporas 12,7 10,4 9 10 8 16 5 13,4 28 11 12 4 15,2 22 25 3 11,0 18 2 7 21 13 14 1 a pH = 4,00

16 Determinación del peso seco
Se separó la biomasa del cultivo líquido en papel filtro pesado previamente. Se eliminó la humedad del papel filtro a 50ºC por 24 horas. Por diferencia de peso se obtuvo la biomasa de cada frasco, y luego se halló el promedio de la biomasa de cada nivel de temperatura y pH.

17 RESULTADOS - pH

18 RESULTADOS - pH Esporas * 10 7 Biomasa * 10 -3 pH = 4,00 40,8 49
42,0 35 pH = 4,60 56,4 38 pH = 5,00 19,4 37 pH = 5,60 30,7 8

19 RESULTADOS

20 Resultados a diferentes temperaturas

21 Resultados - Esporas

22 Resultados - Biomasa

23 Resultados - Biomasa

24 ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Se observó que: - A pH 4.5 se da la mayor producción de biomasa con 49 mg / mL. - A pH 4.4 se obtuvo la mayor producción de esporas con x 107 esporas / mL.

25 Discusión de resultados
Se observó que a 20º C se obtuvo: La mayor concentración de la biomasa con 74 mg. La mejor producción de esporas con una concentración de x 108 esporas / mL.

26 Resultados - Esporas Resultados - Biomasa

27 La mejor producción de biomasa se produjo a los 15 días del cultivo, mientras que la mayor producción de esporas se obtuvo a los 21días.

28 Conclusiones Se determinó que para producción de biomasa y esporas en Beauveria sp PR 11 la temperatura óptima fue de 20 ºC. Sin embargo, tuvierón diferentes dias óptimos de formación.