Amplificación de DNA mediante la técnica de reacción en cadena de polimerasa (PCR). El conocimiento de la secuencia de DNA se utiliza para diseñar dos.

Presentación del tema: "Amplificación de DNA mediante la técnica de reacción en cadena de polimerasa (PCR). El conocimiento de la secuencia de DNA se utiliza para diseñar dos."— Transcripción de la presentación:

1 Amplificación de DNA mediante la técnica de reacción en cadena de polimerasa (PCR). El conocimiento de la secuencia de DNA se utiliza para diseñar dos oligonucleótidos sintéticos de DNA, cada uno complementario con la secuencia en una cadena de DNA bicatenario en extremos opuestos de la región por amplificar. Estos oligonucleótidos actúan como cebadores para la síntesis de DNA in vitro, lo cual lleva a cabo la DNA polimerasa y después se decide cuáles son los segmentos de DNA que han de amplificarse. A. La PCR inicia con un DNA bicatenario y cada ciclo de reacción inicia con un breve periodo de calentamiento para separar las dos cadenas (paso 1). Después de la separación de estas últimas, el DNA se enfría en presencia de grandes cantidades de dos oligonucleótidos de DNA cebadores, los cuales permiten que estos cebadores sufran hibridación con secuencias complementarias en las dos cadenas de DNA (paso 2). Esta mezcla se incuba con la DNA polimerasa y con los cuatro trifosfatos de desoxirribonucleósidos de forma que se sintetiza DNA, iniciando en los dos primeros cebadores (paso 3). El ciclo completo se inicia de nuevo por el tratamiento térmico para separar las cadenas recién sintetizadas de DNA. B. Conforme el procedimiento se realiza una y otra vez, los fragmentos de síntesis reciente actúan como plantillas a su vez y, en unos cuantos ciclos, el DNA predominante es idéntico a la secuencia estudiada, la cual incluye los dos cebadores en la plantilla original. Del DNA utilizado en la reacción original, sólo la secuencia marcada por los dos cebadores se amplifica porque no hay cebadores unidos en otros sitios de la molécula. En el ejemplo ilustrado en la imagen B, tres ciclos de reacciones producen 16 cadenas de DNA, ocho de las cuales (en color rosa oscuro) tienen la misma longitud, corresponden exactamente una con otra de la secuencia original marcada, que se muestra a la extrema izquierda; las otras cadenas contienen DNA adicional al de la secuencia original, el cual se replica en unos cuantos ciclos. Después de tres ciclos adicionales, 240 de las 256 cadenas de DNA corresponden exactamente a la secuencia marcada original y, después de varios ciclos más, prácticamente todas las cadenas de DNA tienen una sola longitud. (Con autorización de Garland Publishing, Inc. From Alberts B, Johnson A, Lewis J, et al. Molecular Biology of the Cell, 5th ed. New York: Garland Science; Con autorización facilitada a través de Copyright Clearance Center, Inc.) De: Cirugía molecular y genómica, Principios de cirugía, 10e Citación: Brunicardi F, Andersen DK, Billiar TR, Dunn DL, Hunter JG, Matthews JB, Pollock RE. Principios de cirugía, 10e; 2015 En: Recuperado: November 08, 2017 Copyright © 2017 McGraw-Hill Education. All rights reserved