Genética forense.

Presentación del tema: "Genética forense."— Transcripción de la presentación:

1 Genética forense

2 Genética forense: La genética forense es una disciplina de la genética en la cual se usan distintas técnicas de biología molecular para resolver ciertos problemas jurídicos; también para la identificación de personas

3 Polimorfismo: cambios en la secuencia del ADN que se dan en más del 1% de la población y que generan una variabilidad genética normal. Clasificación: Polimorfismos de secuencia Polimorfismos de longitud Polimorfismos de nucleótido único (SNPs)

4 Bipartición del embrioblasto

5 ECTODERMO MUTACIÓN EMBRIOBLASTO MESODERMO ENDODERMO

6

7 PRINCIPAL TECNICA UTILIZADA REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
PATRON TRI-ALELICO EN STRs PRINCIPAL TECNICA UTILIZADA REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)

8 Origen de la mutación Errores en la sintesis de sec. Repetitivas:
- Se pueden formar bucles en la unión del cebador al ADN (hasta 3) durante la síntesis del ADN, en el principio del desarrollo embrionario hasta la formación de la capa germinal - La mayoría se corrige, los que no (pequeña parte, al azar) se van a transferir a las células hijas y la mutación va a estar en los tejidos derivados del mesodermo -El cebador puede unirse al ADN habiendo formado hasta 3 bucles, pero cuantos mas bucles mas fácil de detectar la mutación y arreglarla. La mayoría de mutaciones tiene 1 solo bucle por esto.

9

10 Propiedades básicas del STR anormal

11

12 Hay 4 posibles anormalidades de los patrones del STR
En el caso clínico aparece el tipo 1, que no es heredable. En la persona con la mutación, se obtienen dos tipos de masas celulares: A) Una con mutación B) Otra sin mutación. Esto explica el hecho de que las células del cabello no hayan tenido mutación; mientras que las de la sangre y el semen sí.

13 Métodos y materiales: Semen Sangre de los gemelos, padres y hermana Pelos Mucosa bucal

14 Sangre Se anti coaguló Se extrajo el ADN Se utilizó Nanodrop 2000 para medir la concentración Se diluyeron las muestras para futuros análisis

15 Semen, mucosa bucal y pelo:
Se extrajeron Se colocaron en tubos de ensayo por separado Se agregó 200 micro litros de 5 porciento chelex 100 y 4 micro litros de proteína quinasa k Tubos en baños de agua por 60 minutos a 56 grados centígrados. Incubación a 99 grados centígrados Enfriado Centrifugación Sobrenadante se utilizó como sustrato para la pcr

16 Secuenciación del STR (Str typing)
Para la amplificación de repeticiones en tándem cortas se usó Amp Fistr Sinofiler Kit y Abi Gene Amp Pcr System 9700 Los fragmentos de pcr se separaron por electroforesis Diseño de cebador y secuenciación génica Se diseñaron cebadores específicos para amplificar la secuencia VWA.

17 Condiciones de Pcr: 3 minutos a 95 grados centígrados
10 ciclos a 95 grados centígrados por 30 segundos 10 ciclos a 72 grados centígrados por treinta segundos con una disminución de la temperatura de annealing de 0,5 grados por ciclo 20 ciclos con las mismas condiciones seguidas de una incubación de 7 minutos a 72 grados centígrados. Productos de pcr se pusieron en gel de agarosa y se visualizaron con bromuro de etidio Las bandas que tenían el largo el cual se esperaba se purificaron y se subclonaron utilizando un vector Los productos de pcr se analizaron en un sistema de secuencia AB1310 utilizando cebadores t7

18 Resultados

19

20 Se descarto al gemelo C2 ya que cuando se comparo su muestra de sangre con la muestra de semen tomada en la escena del crimen se pudo observar un patrón mutado en el Locus vWA

21 Discusión En este caso se utiliza la examinación de STR debido que uno de los gemelos monocigotas presenta por “suerte” un patrón tri-alélico. Uso de técnicas de STR: usualmente no es utilizada para la discriminación de gemelos. Los STR también pueden ser denominados MICROSATELITES. Y se caracterizan por ser muy inestables y ser muy polimorficos SPLIAGGE MUTATION

22 Pueden ser durante la meiosis o mitosis
Los eventos pueden transcurrir por generaciones Pueden ser durante la meiosis o mitosis

23 El deslizamiento de replicación causado por una incompatibilidad entre hebras de ADN, antes de la meiosis; es la causa de las variaciones de la longitud de los STR. POLIMORFISMO STR

24 Conclusión Problema: ¿cómo diferenciar a hermanos gemelos monocigóticos, en ausencia de huellas dactilares en la escena del crimen? Solución: encontrar alguna diferencia génica entre los hermanos.

25 Muchas gracias por su atención