Actividad in vitro de Levofloxacino (L), Ampicilina (A) y la combinación de Ampicilina y Gentamicina (G) frente a Listeria monocytogenes M. Vivas 1, C.El.

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1 Actividad in vitro de Levofloxacino (L), Ampicilina (A) y la combinación de Ampicilina y Gentamicina (G) frente a Listeria monocytogenes M. Vivas 1, C.El Haj 1,E. Force 1, Garcia-Somoza D 3, Pelegrin I 2, Ariza J 2, Cabellos C 2. Laboratorio de Infección Experimental 1, Servicios de Enfermedades Infecciosas 2 y de Microbiología 3. IDIBELL. Hospital Universitari de Bellvitge y Departament de Ciències Clíniques. Universitat de Barcelona. 1.ABSTRACT Tradicionalmente, el tratamiento de elección para la meningitis causada por Listeria monocytogenes ha sido la combinación de ampicilina y gentamicina. Esta combinación, ha sido cuestionada últimamente debido a la toxicidad de gentamicina y las dudas sobre la eficacia que aportaría a la combinación. Tampoco se conocen muchas alternativas entre las que destacarían cotrimoxazol y quinolonas si bien con estas últimas hay muy poca experiencia. 3. MATERIAL Y MÉTODOS Se utilizó la cepa L.monocytogenes serotipo 4. Se determinaron las CMIs, por el método de micro y macrodilución Se realizaron curvas de letalidad en fase exponencial, con inóculos de 105 (FX5).Las concentraciones de antibióticos estudiadas incluyeron los rangos 8-1/4X MIC; La actividad final se consideró bactericida si lograba una reducción ≥ 3 log UFC/ml del inóculo inicial. En los estudios de las combinaciones se definió como sinergia el descenso  2 log UFC/ml, antagonismo el aumento  2 log UFC/ml e indiferencia al cambio (aumento o descenso) <2 log UFC/ml en la letalidad de la combinación respecto del antibiótico más activo en solitario. 5. CONCLUSIONES 4. RESULTADOS Tabla 1. Determinación de las CMIs por el método de micro y macrodilución (µg/ml). Tabla 2. Diferencias en la reducción de log de ufc/ml a las 6 y 24hs con diferentes concentraciones de Ampicilina, Ampicilina + Gentamicina Y Levofloxacino. Figura 1. Curvas de letalidad en fase exponencial de L.monocytogenes con Levofloxacino. Figura 2. Curvas de letalidad en fase exponencial de L.monocytogenes con Ampicilina. Figura 3a. Curvas de letalidad en fase exponencial de L.monocyotgenes con Ampicilina y Gentamicina. Figura 3b. Curvas de letalidad en fase exponencial de L.monocytogenes con Ampicilina y Gentamicina. 2.INTRODUCCIÓN Introducción: Tradicionalmente, el tratamiento de elección para la meningitis causada por Listeria monocytogenes ha sido la combinación de ampicilina y gentamicina. Esta combinación, ha sido cuestionada últimamente debido a la toxicidad de gentamicina y las dudas sobre la eficacia que aportaría a la combinación. Tampoco se conocen muchas alternativas entre las que destacarían cotrimoxazol y quinolonas si bien con estas últimas hay muy poca experiencia. Objetivo: Estudiar la eficacia de la combinación de Ampicilina más Gentamicina, así como otras alternativas como el Levofloxacino, para estudiar posteriormente su eficacia in vivo. Material y Métodos: Se utilizó la cepa de Listeria monocytogenes serogrupo 4 con CMI (µg/ml) (L 0,5), (A 0,25), (G 0,5). Se realizaron curvas de letalidad en fase exponencial, con inóculos de 10 5 (FX5).Las concentraciones de antibióticos estudiadas incluyeron los rangos 8-1/4X MIC; La actividad final se consideró bactericida si lograba una reducción ≥ 3 log UFC/ml del inóculo inicial. En los estudios de las combinaciones se definió como sinergia el descenso  2 log UFC/ml, antagonismo el aumento  2 log UFC/ml e indiferencia al cambio (aumento o descenso) <2 log UFC/ml en la letalidad de la combinación respecto del antibiótico más activo en solitario. Resultados: En la Tabla 1 se muestran los principales resultados. Ampicilina no es bactericida a ninguna concentración antibiótica estudiada, La combinación de Ampicilina y Gentamicina resultó sinérgica a las 24horas a concentraciones de 1xCMI de gentamicina y a concentraciones de 1x, 1/2x y 1/4xCMI de Ampicilina. Levofloxacino fue activa frente a L. monocytogenes alcanzando concentraciones casi bactericidas a las 24 h a concentraciones 4xCMI. Conclusiones: La adición de Gentamicina a bajas dosis, mejoró claramente la actividad de Ampicilina siendo la combinación bactericida. Levofloxacino puede ser considerado como opción para realizar pruebas in vivo. Listeria monocytogenes ∆ log ufc/ml 0-6h ∆ log ufc/ml 0-24h AMPICILINA A 4x-0,55±0,29-2,12±1,07 A 2x-0,16±0,22-1,13±0,74 A 1x0,21±0,510,96±1,13 AMPICILINA + GENTAMICINA A4x + G1x-3,34±0,44-4,74±0,02 A4x + G 1/2x-2,55±1,63-4,08±1,15 A4x + G1/4x-2,06±2,38-2,40±1,51 A2x + G1x-2,85±1,23-4,11±1,10 A2x + G1/2x-2,92±1,48-4,34±0,74 A2x + G1/4x-1,81±2,19-3,73±1,25 A1x + G1x-3,80±1,07-3,89±1,64 A1x + G1/2x-2,24±1,17-3,32±1,83 A1x + G1/4x-1,69±1,17-2,92±1,64 LEVOFLOXACINO L 4x-2,22±0,38-2,95±1,34 L 2x-2,12±0,39-2,25±0,85 L 1x-1,08±0,780,99±1,79 Control2,38±0,133,08±0,20 La adición de Gentamicina a bajas dosis, mejoró claramente la actividad de Ampicilina siendo la combinación bactericida. Levofloxacino puede ser considerado como opción para realizar pruebas in vivo. LevofloxacinoAmpicilinaGentamicina Listeria monocytogenes0,50,250,5