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Publicada porEssua Mena Modificado hace 10 años
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DETERMINACION FLUORIMETRICADE QUININA EN TONICA Pablo Fernández López
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¿QUE ES LA FLUORESCENCIA?
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FLUORESCENCIA: Absorción molecular de un fotón Emisión una luminiscencia a mayor Salto de Stokes Toma su nombre de la fluorita
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Extensión del sistema de electrones Rigidez estructural Impedimentos estéricos Efecto de átomo pesado interno Naturaleza de la transición Formación de complejos organometálicos Efectos de los sustituyentes FACTORES ESTRUCTURALES
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Extensión del sistema de electrones Extensión del sistema de electrones
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Rigidez estructural
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Impedimentos estéricos cis 1,2-difenileteno trans 1,2-difenileteno
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Efecto de átomo pesado interno FLUORESCENCIA RELATIVA 100% 7% 0.2% <0.05%
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Absortividad molar alta Velocidad de fluorescencia elevada n Absortividad molar baja Velocidad de fluorescencia pequeña Naturaleza de la transición fluorescente
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Formación de complejos organometálicos Cambio en la naturaleza de la transición n -Análisis de metales -Análisis de ligandos poco fluorescentes Favorecer el cruzamiento entre sistemas
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Efectos de los sustityentes Los electrodonadores: -NH 2, -NHR, -NR 2, -OH, y -OR aumentan la eficacia de la fluorescencia,desplazándola a mayores Los electroaceptores: -COOH,-COOR, -CHO, -COR y –NO 2,reducen la eficacia de la fluorescencia al introducir una transición n- *. Los halógenos producen efecto de átomo pesado interno Los grupos sulfónicos no modifican significativamente la fluorescencia
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FACTORES DEL MEDIO Temperatura Polaridad Viscosidad Atomo pesado externo pH Puentes de hidrógeno Otros solutos: atenuación de la fluorescencia
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Calibrado de ácido nalidíxico
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Fluorescencia de la orina
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Fluorescencia del suero sanguíneo
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Fluorescencia de la leche de vaca
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Fluorescencia de la quinina excitación emisión Fluorescencia Longitud de onda (nm)
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Fluorescencia de la quinina excitación emisión Fluorescencia Longitud de onda (nm)
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Fluorescencia de la quinina excitación emisión Fluorescencia Longitud de onda (nm)
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Fluorescencia de la quinina excitación emisión Fluorescencia Longitud de onda (nm)
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Fluorescencia de la quinina excitación emisión Fluorescencia Longitud de onda (nm)
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FUNCIONAMIENTO DE UN FLUORIMETRO
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PROCEDIMIENTO 1.- Preparar disoluciones de 100, 200, 300, 400 y 500 ppb a partir de una disolución de sulfato de quinina de 2.5 ppm y enrasar a 25 ml con H 2 SO 4 0.1 N. 2.- Registrar los espectros de excitación y emisión de una de las muestras y medir la intensidad de fluorescencia a 350 nm de excitación y 450 nm de emisión de todas ellas para construir la recta de calibrado. 3.- Pasar el contenido de un agua tónica a un vaso de precipitado y agitar vigorosamente a temperatura ambiente durante 10 minutos. 4.- Tomar 1.0 ml y añadir la cantidad necesaria de H 2 SO 4 concentrado (36 N) para que en un volumen final de 250 ml sea 0.1 N. 5.- Registrar los espectros de excitación y emisión, comprobando que en estas condiciones la fluorescencia del agua tónica es debida únicamente a la quinina. 6.- Medir la fluorescencia a 350 nm de excitación y 450 nm de emisión calculando la concentración de quinina en el agua tónica a partir de la recta de calibrado. MATERIALESPRODUCTOS - Espectrofluorímetro - Matraces de 25 ml. - Pipetas graduadas. - Vaso precipitado. - Agitador magnético con núcleo. - Agua tónica - H 2 SO 4 - Bisulfato de quinina PRÁCTICA Nº 1 DETERMINACIÓN ESPECTROFLUORIMÉTRICA DE QUININA EN AGUA TÓNICA
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