Instrumentación para cromatografía líquida de alta performance (HPLC)

Presentación del tema: "Instrumentación para cromatografía líquida de alta performance (HPLC)"— Transcripción de la presentación:

1 Instrumentación para cromatografía líquida de alta performance (HPLC)
Dr. Miguel Gilabert

2 Instrumentación para cromatografía líquida de alta performance (HPLC)
Dr. Miguel Gilabert

3 Reservorios (HPLC) Dr. Miguel Gilabert

4 Filtro de entrada (HPLC)
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5 Filtrado de la fase móvil
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6 Desgasado de la fase móvil
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7 Caños y acoples Zonas de baja presión Zonas de alta presión
Caños de PTFE (Politetrafluoretileno) Caños de acero inoxidable al cromo-molibdeno Caños de peek (polietiletilcetona) Dr. Miguel Gilabert

8 Caños y acoples Dr. Miguel Gilabert

9 Bombas Dr. Miguel Gilabert

10 Bombas Dr. Miguel Gilabert

11 Sistemas formadores de gradientes
Mezclado en alta presión Mezclado en baja presión Solvente A Solvente B Solvente A Solvente B Bomba A Bomba B Válvula porcentual Válvula porcentual Camara de mezcla a alta presión Bomba Columna Columna Dr. Miguel Gilabert

12 Filtro de linea Dr. Miguel Gilabert

13 Inyector Dr. Miguel Gilabert

14 Inyector - Solventes de inyección (tratamiento de la muestra)
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15 Guarda columnas o pre-columnas
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16 Columnas Preparativas: di = 21 mm; L = 5, 10, 15 y 25 cm
Partículas de 5 y 10 um Semi preparativas: di = 10 mm; L = 5, 10, 15 y 25 cm Partículas de 5 y 10 um Analíticas: di = 5, 3, 1 mm; L = 5, 10, 15 y 25 cm Partículas de 2.6, 5 y 10 um Dr. Miguel Gilabert

17 Columnas - Hornos para columnas - Partículas de núcleo solido (video)
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18 UPLC Y UHPLC Rs: Resolución N: Eficiencia Dp: tamaño de partícula
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19 UPLC Y UHPLC Curvas de Van deemter – velocidad de flujo
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20 UPLC Y UHPLC 528 bar 24 bar Dr. Miguel Gilabert

21 UPLC Y UHPLC L / dp = constante Dr. Miguel Gilabert

22 UPLC Y UHPLC Dr. Miguel Gilabert

23 UPLC Y UHPLC HPLC - Diametro interno 3 a 10 um
- Presión inferior a 400 bar - Alta capacidad de carga - Detectores para grandes volúmenes - Largos tiempos de análisis UPLC - Diametro interno de 0,75 a 1,8 um - Presión hasta 1000 bar - Baja capacidad de carga - Ideal para detectores de masas - Cortos tiempos de análisis (similares a los de cromatografía gaseosa) Dr. Miguel Gilabert

24 Detectores - Aquellos que comparan una propiedad de la fase móvil con la misma propiedad del soluto (refractómetro diferencial, detector de conductividad, etc.) - Aquellos que miden una propiedad del soluto (Absorción en UV o Visible, detector polarográfico, etc.) En todos los casos los volumen de celda deben ser pequeños para evitar la difusión Dr. Miguel Gilabert

25 Detector de índice de refracción (RI)
i = c/vi i = Índice de refracción para la frecuencia c = velocidad del haz en el vacío vi = velocidad de la radiación en el medio Ley de Snel 1(sen 1) =  2(sen 2) Densidad:  = (-1)d/d n = ir; d = densidad Temperatura:  = (-1)c(t) t = temperatura Compresibilidad:  = k(-1)P k = cte; P = presion Dr. Miguel Gilabert

26 Detector de índice de refracción (RI)
Dr. Miguel Gilabert

27 Detector de índice de refracción (RI)
Dr. Miguel Gilabert

28 Detector de índice de refracción (RI)
- Responde a casi cualquier soluto (universal). Proporciona sensibilidad, estabilidad y reproducibilidad para el análisis de componentes con poca o ninguna absorción de UV. - Muy sensible a la temperatura. - No es posible trabajar con gradientes. - Entre 100 y 1000 veces menos sensible que un detector UV. Dr. Miguel Gilabert

29 A = e.b.c Detector UV-vis - Elevada sensibilidad.
- Amplio rango lineal. - Estable frente a cambios de Temperatura, cambios de caudal y cambios en la composición de la fase movil. - Solo es capaz de detectar sustancias que absorben en UV y visible. A = e.b.c A: Absorbancia e: Absortividad molar b: Camino óptico c: concentración Dr. Miguel Gilabert

30 Detector UV-Visible Dr. Miguel Gilabert

31 Detector de arreglo de diodos (DAD, PDA)
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32 ¡Gracias por su atención!
Dr. Miguel Gilabert