1 Calcio Calcio iónico Magnesio Fósforo PTHI 25 Vit D 1,25 D Marcadores F y R Calcio Fósforo Magnesio Sodio Urico Citrato Oxálico Cistina Marcadores R.

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1 1 Calcio Calcio iónico Magnesio Fósforo PTHI 25 Vit D 1,25 D Marcadores F y R Calcio Fósforo Magnesio Sodio Urico Citrato Oxálico Cistina Marcadores R SANGRE ORINA LITIASIS

2 2 Calcio H+ Fósforo Magnesio H+ Sodio Urico Citrato H+ Oxálico H+ Cistina Marcadores R Clearence Reabs tub fosforo ORINA 2 HS relación ca/cr Reabs tubular fosforo Clearence creat Marcadores R 2ª orina espontanea Relación ca/cr Marcadores R ORINA 24 HS

3 3 Cl creat 24 hs: cr orina x diu24 c suero x 1440 Cl acido urico Cl de fosforo Cl creat 2 hs: cr orina x diu2 cr suero x 120 Cl corregido: cl creat x 1.73 sup corp I D I M

4 4 Reabs tub PO4: 100 - fosf orina x crea suero x 100 fosf suero x crea orina I D I M

5 5 1)Medición de calcio total e iónico. 2)Suero o plasma con heparina. Nunca EDTA, citrato, oxalato.

6 6 Calcio iónico: 1)Factores que afecten el pH de la muestra (contacto con el aire). Al aumentar protones (dism pH) disminuye el calcio unido a albumina y aumenta el iónico. 2)Anticoagulante inadecuado 3)Anticoagulante en exceso (dilución de la muestra) I D I M

7 7 CALCIO Efecto de albumina sobre calcio total: Calcio correg : calcio total + 0.8 ( 4 – alb)

8 8 Buena concordancia, pero VI… ademas de 2 mediciones: ca y alb

9 9 I D I M FOSFORO Y MAGNESIO: 1)Suero 2)Evitar hemólisis PTH Y MARCADORES OSEOS: 1)FREEZER 2)Evitar hemolisis

10 10 I D I M MARCADORES. EN AYUNAS Y A LA MAÑANA TODO EL METAB FOSFOCALCICO EN AYUNAS!

11 11 Dificultades en la interpretación clínica del dosaje de PTH por las metodologías actuales

12 12 I D I M PARATHORMONA

13 13 Problemas en dosaje PTH Distintos anticuerpos Distintos fragmentos moleculares Distintas cantidades de esos fragmentos. Distintas formas moleculares (NH2-PTH) Tipo de muestra Estabilidad de PTH Variabilidad biológica Dificultad en rango de referencia

14 14 Este anticuerpo varia y confiere distinta especifidad

15 15 Aumenta a medida que disminuye el GFR Es producido por la glandula Efectos opuestos a 1-84 7 Este fragmento es medido por todos los kits de PTH disponibles

16 16 “WHOLE” PTH

17 17 relacion “whole” PTH/ “intact” PTH: < 1

18 18 J. Clin. Endocrinol. Metab. 2010 95:3745-3749

19 ¿VENTAJAS WHOLE PTH?

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23 PTH pg/ml x 0.106 : pM

24 PTH NEQAS 2012. CONTROL DE CALIDAD EXTERNO 57152 737

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26 PTHI STANDARD DE REFERENCIA INTERNACIONAL IS 95/646

27 Problemas en dosaje PTH Distintos anticuerpos Distintos fragmentos moleculares Distintas cantidades de esos fragmentos. Distintas formas moleculares (NH2-PTH) Tipo de muestra Estabilidad de PTH Variabilidad biológica Dificultad en rango de referencia

28 Problemas en dosaje PTH Distintos anticuerpos Distintos fragmentos moleculares Distintas cantidades de esos fragmentos. Distintas formas moleculares (NH2-PTH) Tipo de muestra Estabilidad de PTH Variabilidad biológica Dificultad en rango de referencia

29 Problemas en dosaje PTH Distintos anticuerpos Distintos fragmentos moleculares Distintas cantidades de esos fragmentos. Distintas formas moleculares (NH2-PTH) Tipo de muestra Estabilidad de PTH Variabilidad biológica Dificultad en rango de referencia

30 Problemas en dosaje PTH Distintos anticuerpos Distintos fragmentos moleculares Distintas cantidades de esos fragmentos. Distintas formas moleculares (NH2-PTH) Tipo de muestra Estabilidad de PTH Variabilidad biológica Dificultad en rango de referencia

31 Factores a tener en cuenta para el valor de referencia Tipo de muestra Estado nutricional de vit D Edad Clearence de creat Ingesta calcica BMI ETNIA

32 I D I M Dosaje de 25D Estado Nutricional 1,25 DI HIDROXI Vit D NO !!!!!!

33 ETAPA PREANALITICA

34 Clinical Chemistry 2005:51

35 ETAPA ANALITICA

36 -2SD-1SDALTM+1SD+2SD 11162327 DEQAS 2011 (ng/ml)

37 Problemas Método Especificidad Sensibilidad Estandarización: necesidad de un st. Internacional y un metodo de referencia Experiencia propia con el ensayo

38 Métodos para 25OH D COMPETICION PROTEICA HPLC RIA ELISA LC-MS in house.

39 Métodos para 25(OH)D AUTOMATICOS DIASORIN Quimioluminiscencia (2004) SIEMENS Quimioluminiscencia ABBOTT Quimioluminiscencia ROCHE Electroquimioluminiscencia IDS – ISYS Quimioluminiscencia VITROS Quimioluminiscencia

40 Listado de trabajos nuevos ensayos 2012/14 Heijboer et al. Clin Chem 58:3 2012 Ong et al Clin Chim Acta 413 2012 Barake et al, JCEM 97(3). 2012 Tahsin et al, Clin Nutr 2012 Won Moon et al Clinical Biochem 45. 2012 Farrell et al Clin Chem 58:3. 2012 Van den Ouweland JM et al, J Chrom 878. 2012 Chen Y et al, Clin Biochem 2012 Emmen JM et al, Clin Chem Lab Med 2012 Jenssen M et al, Steroids 2012 Farrell et cl Clin Chem Lab Med 2012

41 Listado de trabajos nuevos ensayos 2012/14 Becker et al, Clin Chem 2012 Bianchi S et al, Clin Biochem 2012 De Koning L et al Clin Chim Acta 2013 Cavallier E et al, Clin Chem Lab Med 2013 Depreter B et al, Clin Chim Acta 2013 Glendenning P et al Clin Biochem 2013 Holmes EW et al, AJCP 2013 Su Z et al, Clin Chim Acta 2014 Farrell C et al, Clin Chem Lab Med 2014 Cavallier E et al, Clin Chim Acta 2014

42 1) Gran variabilidad entre ensayos 2) Gran variabilidad con respecto a LC/MS in house 3) Gran variabilidad en respuesta a standard internacional SRM 972. 4) Linealidad (anticuerpos heterófilos). El corte (20 ng o 30 ng) debería ser ensayo-especifico. Seguimiento en el mismo laboratorio Urgencia en la estandarización.

43 Fuentes de variación Especificidad: Dos moléculas en circulación (25D3 Y 25D2)

44 ENSAYOEMPRESA% 25D3%25D2 RIADIASORIN100 LIAISONDIASORIN100 CENTAUROSIEMENS 97.4106 COBAS/ MODULAR ROCHE 10092 ARCHITECTABBOTT 10582 RIA ctDIASOURCE 100 ELISADIASOURCE 10083 ELISAINMUNODIAG NOSTIK 10023.4

45 Fuentes de variación Especificidad: Dos moléculas en circulación (D3 Y D2) 24,25 (OH)2 D

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47 204060 25 D ng/ml 8 ng/ml 4 ng/ml

48 ENSAYOEMPRESA% 25D3%25D2%24,25 RIADIASORIN100 LIAISONDIASORIN100 CENTAUROSIEMENS 97.4106- COBAS/ MODULAR ROCHE 10092149 ARCHITECTABBOTT 10582112 RIA ctDIASOURCE 100 95 ELISADIASOURCE 10083100 ELISAINMUNODIAG NOSTIK 10023.4-

49 Fuentes de variación Especificidad: Dos moléculas en circulación (D3 Y D2) 24,25 (OH)2 C3- epi 25D

50 ENSAYOEMPRESA% 25D3%25D2%24,25% C3-EPI RIADIASORIN100 - LIAISONDIASORIN100 -1.3 CENTAUROSIEMENS 101105-1.0 COBAS/ MODULAR ROCHE 1009214991 ARCHITECTABBOTT 105821122.7 RIA ctDIASOURCE 100 95- ELISADIASOURCE 100831000.2 ELISAINMUNODIAG NOSTIK 10023.4--

51 Binkley et al, Journal of Clin Densitom 2013

52 Fuentes de Variación Unión muy importante a DBP: 1) En ensayos automatizados: Dudas con la disociación de la 25D de DBP. 2) Dependencia entre-ensayo de la cc de DBP. Poblaciones “especiales”: embarazo, hemodialisis, UTI

53 Cavalier E et al, Clin Chim Acta 2014

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57 Las buenas noticias DESARROLLO DE METODO DE REFERENCIA: NIST Y UNIVERSIDAD DE GHENT DESARROLLO DE PROCEDIMIENTOS STANDARES DE REFERENCIA DESARROLLO DE CALIBRADORES DE REFERENCIA. SRM 2972 DESARROLLO DE STANDARDS DE REFERENCIA (SRM 972 Y SRM 972a)

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59 ¿Qué puede hacer cada laboratorio? 1)Estricto control interno 2)Participar de un control externo DEQAS / RIQAS / CAP / CEMIC

60 DEQAS Vitamin D External Quality Assessment Scheme

61 ¿Que devuelve el DEQAS? Media de todos los metodos (ALTM) Media de cada metodo (Diasorin- Siemens- Roche, etc) Desde Abril 2013, valores de las muestras medidos por metodo de referencia internacional (NIST)

62 DEQAS REPORT 2013

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65 ¿valor de referencia o valor de corte?

66 FACTORES QUE AFECTAN LA SINTESIS CUTANEA DE COLECALCIFEROL SOL MELANINA EDAD LATITUD ESTACION VESTIMENTA PANTALLAS SOLARES

67 Deficit: menor 20 ng/ml Insuficiencia: 20-29 ng/ml Suficiencia: mayor de 30