Evaluación de la Inmunidad INMUNODEFICIENCIAS HIPERSENSIBILIDAD AUTOINMUNIDAD

Evaluación Inmunidad humoral Medición de la concentración Ig en suero Linfocitos B CD19 y CD20

Inmunidad celular (CMI) Pruebas cutanéas de hipersensibilidad Paperas, PPD, candida, toxoide tetánico, toxoide diftérico Estimulación in vitro de linfocitos PHA, PWM, Con A, antígenos, superantígenos, células alogénicas, anticuerpos anti CD3, CD2, CD43, (CD11a,CD18). Linfocitos activados con PMA, ionomicina, CD40L Fagocitos Ingestión de partículas Prueba de reducción del NBT

Sangre: leucocitos totales Médula ósea: biopsia OTROS Sangre: leucocitos totales Médula ósea: biopsia Biopsia: intestinal, piel, timo Complemento

TÉCNICAS (FUNDAMENTOS)

EIA Aplicaciones Ig, CD, Citocinas Ag - Ab + E S P desarrollo color 2oAb S S PP 2oAb antiCD4 - CD4 + antiCD4 -E S P desarrollo color SS PP anti1L-12 - IL12 + antiIL-12 -E S P desarrollo color SS PP

Hemólisis Localizada en Gel La Técnica de Jerne demuestra la funcionalidad de las células plasmáticas antígeno específicas

SEPARACIÓN DE CÉLULAS MONONUCLEARES

SEPARACIÓN DE CÉLULAS MONONUCLEARES POR GRADIENTE Diluir 1:2 con BSS 5 mL + Heparina Estratificar 1500 rpm x 45 min 2.5 mL sangre + 3 mL Ficoll-Hypaque Plasma Células mononucleares Ficoll-Hypaque GR y Granulocitos

EVALUACIÓN DE LA INMUNIDAD El sistema inmunológico se evalúa mediante pruebas que permiten su identificación, cuantificación y caracterización funcional

INMUNIDAD CELULAR Pruebas cutáneas Cuantificación de linfocitos T y B Respuesta proliferativa a mitógenos (fitohemaglutinina, concanavalina A) Pruebas para macrófagos y neutrófilos (Fagocitosis : movilidad, quimiotaxis, reconocimiento, ingestión, digestión, muerte intracelular) Expresión y producción de citocinas

OBSERVAR LA FORMACIÓN DE ROSETAS 3 ml BSS 1500 rpm x 10 min resuspender con 3 mL BSS resuspender en 0.5 mL BSS Se cuenta y se ajusta 4 x 106 cel/ml desechar sobrenadante 0.25 mL de células 4x106 + 0.25 mL GRC al 1% 500 rpm x 3 min 37 C x 3 min 4 C, 4 horas OBSERVAR LA FORMACIÓN DE ROSETAS

INMUNOFLUORESCENCIA CITOMETRÍA DE FLUJO FACS APLICACIONES: CD, MHC, CITOCINAS INTRACELULARES Permite identificar células individuales por sus Ag superficiales Marcaje flujo laser detección CPU histograma continuo desviación luz # emisión eventos fluorescencia

SEPARACIÓN DE CÉLULAS MONONUCLEARES POR GRADIENTE DE DENSIDAD Y ENSAYOS DE PROLIFERACIÓN C mononucleares microplaca PHA 3HTdr

FAGOCITOS

Fagocitosis

PRUEBA DE REDUCCIÓN DEL NBT Prueba funcional. Capacidad para producir anión superóxido NBT compuesto amarillo Formazan oxidado reducido hidrosoluble PMA LPS Partículas O2 + NBT Formazan

Where are macrophages found in the human body? What cells carry out phagocytosis? What is a phagosome? What is in a lysosome? How is a phagolysosome formed? What happens during an “oxygen burst”? What are the end products of phagocytosis? What happens to the products of phagocytosis?