Resultados, información y preguntas PAGE-SDS INDUCCIÓN DE PROTEÍNA RECOMBINANTE 18 marzo, 2015

COMENTARIOS: ¿Qué es lo que deben de hacer con las imágenes de sus geles? Impriman la imagen de su gel Midan la longitud del gel, del inicio del gel al final. Midan cuanto migró cada banda de peso molecular. Del inicio del gel hasta donde está la banda. Calculen el Rf de cada banda del estándar. Saquen el logaritmo del peso molecular de las bandas del estándar Hagan la gráfica de log de peso molecular vs Rf Calculen el peso molecular de la β-lactamasa. Para ello ver la banda que se va intensificando conforme el tiempo de inducción es mayor. O bien revisar lo que les muestro después de las imágenes de los geles Por fa intenten responder a las dos preguntas planteadas en la última transparencia Nos vemos el Jueves con su presentación para la discusión

SeeBlue Plus2 Preteñido Std de peso molecular SeeBlue Plus2 Preteñido (Invitrogen) Fosforilasa B Mioglobina

Curva estándar de proteínas producto del corrimiento electroforético en gel de poliacrilamida-SDS (PAGE-SDS) Para encontrar en donde está la banda de interés se hace una curva estándar. interpolar el log del peso molecular y conocer en que posición o Rf debe estar la proteína

No recuerdo que equipo fue el que primero puso sus muestras EN CADA GL pero aquí les pongo sus geles Mesa 2: Equipos 3 y 4 Mesa 1: Equipos 1 y 2 0 20 40 60 std 0 20 40 60 0 20 40 60 std 0 20 40 60 98 62 49 38 28 17 14 98 62 49 38 28 17 14 Mesa 3: Equipos 5 y 6 0 20 40 60 std 0 20 40 60 Solo recuerden que el estándar en color amarillo-naranja corresponde al peso molecular de 98 kDa. 98 62 49 38 28 17 14

Buscar la secuencia de nucleótidos de un gen 1. Ir a la página del National center for biotechnology research 2. Buscar en Gene 3. Anotar la secuencia buscada en inglés

Al pulsar la tecla da los resultados, por ejemplo, PARA TEM1 DE E. coli Pulsar en donde dice E. coli

Buscar en la página en donde dice formato FASTA y pulsar

El gene en formato FASTA

Traducir a proteína Al tomar la secuencia en formato fasta la pueden introducir a cualquier buscador que lo que haga sea traducir la secuencia de nucleótidos a proteína, De esa manera ustedes obtendrán el peso molecular esperado de su proteína

TEM1. beta lactamasa de E. coli proteína madura MHPETLVK VKDAEDQLGA RVGYIELDLN SGKILESFRP EERFPMMSTF KVLLCGAVLS RVDAGQEQLG RRIHYSQNDL VEYSPVTEKH LTDGMTVREL CSAAITMSDN TAANLLLTTI GGPKELTAFL HNMGDHVTRL DRWEPELNEA IPNDERDTTM PAAMATTLRK LLTGELLTLA SRQQLIDWME ADKVAGPLLR SALPAGWFIA DKSGAGERGS RGIIAALGPD GKPSRIVVIY TTGSQATMDE RNRQIAEIGA SLIKHW Peso molecular de 28,905 daltones PREGUNTAS: ¿Cuál es el peso molecular de la secuencia de ácidos nucleicos para que nos de un peso molecular de la proteína en 28,905 daltones? ¿Porqué nuestro inserto en el gel de agarosa, aquel que usamos para detectar los productos de la restricción, era de 1200 pb?