MICROARRAY DE EXPRESIÓN PARA EL ESTUDIO DE LAS ALTERACIONES DEL METABOLISMO LIPÍDICO

Se han seleccionado 319 clones del cDNA humanos (IMAGE): Controles Síntesis de colesterol Ciclo celular Beta-oxidación Metabolismo lipídico Transducción de señales Obesidad Respuesta a estrés Factores de transcripción Receptores nucleares Etc. 23 controles comerciales (genes artificiales) Lucideas Universal ScoreCard 10 controles de calibración 8 controles de relación Cy3/Cy5 3 controles de purificación 2 controles negativos

Diseño del microarray v2.2 Los 23 controles se imprimenpor triplicado dos localizaciones diferentes de cada subarray. Cada sonda se imprime por triplicado, en dos localizaciones diferentes. EN TOTAL 2592 PUNTOS 10 µm 6 mm 8,4 mm

Células HepG2 tratadas con lovastatina Media de las 6 replicas Grafico realizado con PathwayEditor ( © Elmar Trost & Bernhard Mecnik) basandose en KEGG PATHWAY Database (http://www.genome.ad.jp/kegg/pathway.html)

Células HL60 tratadas con SKF 104976 48h SKF Celulas HL60 Grafico realizado con PathwayEditor ( © Elmar Trost & Bernhard Mecnik) basandose en KEGG PATHWAY Database (http://www.genome.ad.jp/kegg/pathway.html)

Células HL60 tratadas con SKF 104976 + LDL 48h SKF LDL Grafico realizado con PathwayEditor ( © Elmar Trost & Bernhard Mecnik) basandose en KEGG PATHWAY Database (http://www.genome.ad.jp/kegg/pathway.html)

Regulación transcripcinal por esteroles: SREBP Adaptado de: http://www4.utsouthwestern.edu/moleculargenetics/pages/rawson/lab.html

Búsqueda de nuevos genes que responden a colesterol

Regulación de la expresión de la DHCR24 por colesterol

Localización del promotor de la DHCR24 mediante RACE-PCR

Actividad del promotor de la DHCR24

Posibles factores de transcripción en el promotor de la DHCR24 SRE

Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA) Sonda consenso SRE Sonda DHCR24 - Extracto nuclear + + + + - + + + + + + - + + + + - Sonda DHCR24 no marcada + + Retardo Retardo Sonda-Cy5 libre Sonda-Cy5 libre

Papel del colesterol en la regulación del ciclo celular 400 G1 Control 0 h Células G2/M S 1023 DNA 1023 DNA 400 Células G1 G2/M S SKF 1, 5 µM 48 h 60 h

La parada del ciclo en G2 es debida a la inhibición de la actividad cdc2 Martinez-Botas, J., Suarez, Y., Ferruelo, A. J., Gomez-Coronado, D., and Lasuncion, M. A. (1999). Cholesterol starvation decreases p34(cdc2) kinase activity and arrests the cell cycle at G2. Faseb J 13, 1359-1370.

Resultados: Parada Grafico realizado con PathwayEditor ( © Elmar Trost & Bernhard Mecnik) basandose en KEGG PATHWAY Database (http://www.genome.ad.jp/kegg/pathway.html)

MODIFICACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA Y LOS FACTORES DE RIESGO CARDIOVASCULAR EN LA OBESIDAD MÓRBIDA

Tejido adiposo subcutáneo Agrupamiento jerárquico

Cluster 10

Cluster 4

Cluster 3

Incluir algun gen mas y comprobarlo en el array Cluster 8

Relación de los patrones de expresión con las características fenotípicas

Sin factores de riesgo cardiovascular Hipertensión y diabetes Banco de muestras de > 70 pacientes: Tejido adiposo subcutáneo Tejido adiposo visceral Músculo Sangre Plasma Sin factores de riesgo cardiovascular 8 ♀ Controles no obesos 9 ♀ Hipertensión y diabetes 6 ♀ Hipertensión 8 ♀

Bioquímica-Investigación Miguel Ángel Lasunción Diego Gómez-Coronado Javier Martínez-Botas Oscar Pastor Jonatan Sánchez Nuria Olea Miguel Martín Sección Endocrinología y Nutrición: Clotilde Vázquez Nuria Palacios Servicio de Cirugía General y Digestivo: Virgilio Fresneda Moreno Roberto Peromingo