cDNAs de isoformas de PKC a bovino cerebro humano cerebro, células T rata, conejo cerebro ratón cerebro, fibroblastos bI rata, conejo cerebro humano bazo bII bovino cerebro humano cerebro, bazo rata, ratón, cerebro conejo cerebro g bovino cerebro humano cerebro rata, conejo cerebro d rata cerebro ratón cerebro, células mieloides e conejo, rata cerebro ratón cerebro z rata cerebro humano células mieloides h ratón piel humano queratinocitos rata pulmón q ratón piel Convencionales Novel Atípica

PRKs (PKC related kinases) PKC CONVENCIONALES: Activadas por PS en forma dependiente de Ca2+ Unen DAG Blanco de PMA PKC NUEVAS: Insensibles a Ca2+ Activadas x DAG y PMA en presencia de PS PKC ATIPICAS No responden a PMA/DAG PRKs (PKC related kinases) Insensibles a Ca2+, DAG o PMA Se unen a Rho activo

Dendograma basado en comparación de secuencia de familia de PKCs

ESTRUCTURA DE LOS DOMINIOS DE LAS SUBFAMILIAS DE PKC

DOMINIO C1 Presente en cPKCs y nPKC Dos dedos de Zn: C1a y C1b Motivo: H – X12 – C – X2- C – X13/14 – C – X2 – H – X2 – C – X7 – C Sitio de unión para DAG y PMA

PROTEINAS QUE CONTIENEN DOMINIOS C1 Proteína Dedo Zn Unión a PMA Comentario DAG kinasa 2 No C1 no necesario para unión de DAG o catálisis Quimerina 1 Sí PMA estimula actividad tipo GAP contra Rac PKD 2 Sí Activada x PMA y DAG Munc-13 1 n.h. Homólogo mamífero de Unc-13; sinaptosomal Raf 1 No C1 se une a prenilo de Ras Ksr 1 n.h. Kinasa relacionada a Raf Vav 1 Sí GEF para Ras Stac 1 n.h. proteína de cerebro con SH3

DOMINIO C2 Presente en otras proteínas: sinaptotagmina, rabfilina, PLs, GAPs Confiere unión a PS/Ca2+ Estructura : Sandwich b compacto: 2 x 4 hojas antiparalelas 5 Asp para unión de Ca2+ Ausente en nPKCs y aPKC, pero ~ a Vo (faltan algunos Ds) Función : interacción con otras proteínas C2A y C2B de syn.: sintaxina y clatrina AP2 RACKs (Receptor for Activated PKCs): no sustrato, sí unión lleva a membrana

DOMINIO HR1 3 repeticiones de 55 aa Une Rho? Conservado básico Conservado acídico Conservado hidrofóbico

Dominio C1 Dominio C2 Dominios C3+C4 PMA catalítico Zn Zn Unión de S Unión de nucleótido Dominios C3+C4 catalítico Dominio C1 Zn Zn Unión de S Aspx5  Dominio C2 (sinaptotagmina) conservados

ESTRUCTURA PRIMARIA DE LAS FAMILIAS DE PKC

MODELO DE REGULACION DE cPKC pseudoS 2 transPi 1 4 autoPi 3 autoPi

Regulación mediada por PKC

LIGANDO LIGANDO (hormonas, etc) RECEPTOR TRANSMISOR (e.g.Proteinas G) EFECTOR SEGUNDO MENSAJERO BLANCO 1 BLANCO 2 BLANCO 3 EXPRESION DE GENES (hormona, factores de crec. citokinas) (Ad.ciclasa, PLs, PI3Ks, otros) cAMP, DAG,Ca PIP3, otros PKA, PKB, PKC Raf,MAPK, S6K CREB, myc, fos, jun, NF-kB LIGANDO (hormonas, etc) RECEPTOR