Estudiantes Eduviges Bustos A Karina Díaz López Laura Gurdián L. Anticuerpos conjugados de 7-etil-10-hidroxicamptotecina (SN-38) dirigida hacia la quimioterapia del cáncer Sung-Ju Moon,Serengulam V. Govindan, Thomas M. Cardillo, Christopher A. D’Souza,† Hans J. Hansen, and David M. Goldenberg Immunomedics, Inc., Morris Plains, New Jersey 07950, Garden State Cancer Center at the Center for Molecular Medicine and Immunology, BelleVille, New Jersey 07109 ReceiVed June 16, 2008 Estudiantes Eduviges Bustos A Karina Díaz López Laura Gurdián L.

Objetivo Aumentar la selectividad del SN-38 hacia los sitios tumurales, utilizando anticuerpos monoclonales selectivos para incrementar la solubilidad y el índice terapeutico.

Contenidos Descripción de la síntesis de los derivados bifuncionales del SN-38. Características in vitro de los anticuerpos conjugados.

Fármaco base Irinotecán (CPT-11) Metabolito Activo En el artículo se trabaja con el SN-38 directamente, ya que el Irintecán tiene muchos EA. El SN-38 es un inhibidor de la Topoisomerasa I Metabolito Activo Pertenece a la clase de 20(s)camptotecina (CPTA)

INHIBIDOR DE TOPOISOMERASA I Topoisomerasas del ADN: enzimas nucleares que controlan, mantienen y modifican estructuras y topología del ADN durante los procesos de replicación y traslación del material genético. Topoisomerasa I. Corta una hebra y permite que la molécula de ADN rote alrededor del enlace fosfodiester, liberando la tensión producto del superenrollamiento del ADN. No dependiente de ATP.   Irinotecan es muy específico en la fase S del ciclo celular y ocasionan una parada del ciclo celular en la fase G2.

Fármacos anticancerosos que ejercen su acción a este nivel, estimulan y estabilizan complejos ADN-enzima provocando la ruptura mantenida de la cadena de ADN y la pérdida de su función. Irinotecán: específico en la fase S del ciclo celular y detiene el ciclo celular en la fase G2.

COMPLEJO DROGA mAb CONJUGADO RECEPTOR CELULAR ANTICUERPO DROGA ESPACIADOR ? ? RECEPTOR EN CELULA TUMORAL ? Esto es lo que se busca: Hacer modificaciones a la droga para aumentar su hidrosolubilidad, proteger el anillo de lactona en la posición 20. Buscar un espaciador adecuado para que se una el anticuerpo más apropiado (selectivo) y así tener el efecto de la droga sobre el receptor tumoral

RESULTADOS

DERIVADOS DEL SN-38 (10 Y 20) Lactona intacta: actividad farmacológica Estos son los derivados que se sustituyen en posicion 10 (necesita grupos pequeños y polares) y 20 (se necesita impedimento estérico, para impedir que se abra el anillo de lactona). Escogieron el 1ª (encerrado en rojo).

SINTESIS DEL SN-38 BIFUNCIONAL,CL-SN-38 (3) El grupo fenólico fue protegido con BOC porque puede ser removido selectivamente por TFA en corto tiempo. TFA:trifluoroacético

Anticuerpos utilizados                                                                                                                                                                                     Anticuerpos utilizados Anti-CEACAM5 mAb, hMN-14, (labetuzumab) Anti-EGP-1 mAb, Hrs7 Anti-CD22 mAb, hLL2 (epratuzumab) CONTROL Escogieron estos, por tener un efecto selectivo y significante en carcinoma de colon y pulmón en ratones. Selectivo y significante efecto terapéutico en carcinoma de colon y pulmón de ratones

Ensayo de Ellman El reactivo Ellman es utilizado para medir la cantidad de grupos tiol en el anticuerpo. El compuesto reacciona con un grupo tiol para liberar 2-nitro-5-tiobenzoato (TNB). TNB se ioniza a TNB2 en ph neutro o alcalino, da color amarillo

Espaciadores Azida PEG Grupo maleimide desprotege al grupo OH de la posicion 10 al formar el carbamato; por lo tanto primero ,meten una azida incorporando un enlazador, que contiene la fracción PABOH. Esto fue conceptualizado para superar el obstáculo de síntesis en la formación de la 20-carbonato, con la posterior cicloadición para permitir la introducción del grupo maleimide. Maleimida

DERIVADOS BIFUNCIONALES DEL SN-38 De los derivados obtenidos agregan grupos éster y carbamato para determinar cual de los dos grupos le da una mayor estabilidad al compuesto. Posteriormente se dieron cuenta que el más estable es el que contiene el carbamato.

Resultados MRS: corresponde a una razón de sustitución molar, o sea cantidad de fármaco q puedo colocar por anticuerpo. hLL2 se utiliza como control. hMN-14 y hRS7 anticuerpos monoclonales unidos a SN-38. Circulo y cuadros rojos corresponden a los espaciadores unidos a la droga por medio de un ester y los circulo y cuadros celestes a los casos en q se utilizo un carbonato.

Resultados Presentan mayor tiempo de vida media los espaciadores que presentan una porción de carbonato unida a la droga. Los de menor tiempo de vida media las prodrogas con ester en el espaciador PBS: Buffer de Fosfatos

Resultados Buffer de fosfatos 7 28 16 Buffer de fosfatos 21 17 25 Cinetica de liberación de SN-38 para varios derivados bifuncionales Suero Contrario a lo q se pensaba las drogas que presentan un ester fueron más estables que el carbonato lo q se evidencia en la gráfica farmaco 17 mas estable y liberación constante. Lo q confirma que diferncias en el espaciador determinan la estabilidad

Resultados Valor de Kd determina el grado de unión de los anticuerpos monoclonales a las células. La unión a células de los anticuerpos monoclonales modificados son muy similares a los no modificado, demostrando que el espaciador no modifico el grado de unión Células LoVo: línea de células de adenocarcinoma de colon humano

Resultados Diferencias no significativas De acuerdo al IC50, el 7 es mas citotóxico que el 21 y también debido a la mayor cantidad de droga por anticuerpo (MRS)

Conclusiones La presencia de un corto espaciador de PEG en el sitio de enlace facilita la solubilidad acuosa. Existe una correlación entre la estabilidad biológica y la aparente hidrofobicidad del espaciador. Varios de los anticuerpos conjugados podrían ser sustituidos en un rango de 5-7 por la droga.

MUCHAS GRACIAS!!!