Microscopia de fluorescencia confocal con exploración láser

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Transcripción de la presentación:

Microscopia de fluorescencia confocal con exploración láser Microscopia de fluorescencia confocal con exploración láser. (a) Los trayectos de la luz en un microscopio de fluorescencia confocal. La luz de longitud de onda corta (azul) proviene de una fuente láser, pasa por una abertura diminuta y se refleja en un espejo dicroico (un tipo de espejo que refleja ciertas longitudes de onda y transmite otras) hacia una lente del objetivo y se enfoca en una mancha en el plano de la muestra. Los fluorocromos de la muestra absorben la luz incidente y emiten luz de mayor longitud de onda, la cual puede pasar por el espejo dicroico y enfocarse en un plano que contiene una abertura puntual. Luego, la luz pasa a un tubo fotomultiplicador que amplifica la señal y la transmite a una computadora, la cual forma una imagen procesada digitalizada. Cualquier rayo de luz emitido por arriba o debajo del plano óptico de la muestra no pasa por la abertura diminuta, por lo que no contribuye a la formación de la imagen. Este diagrama muestra la iluminación de un solo punto en la muestra. Distintos sitios de la muestra se iluminan mediante un proceso de barrido con láser. El diámetro de la abertura puntual es ajustable. Mientras menor sea la abertura, es más delgado el corte óptico y mayor la resolución, pero la señal es menos intensa. (b) Micrografías con fluorescencia confocal de tres cortes ópticos separados, cada uno de 0.3 μm de grosor, de un núcleo de levadura teñido con dos anticuerpos con marca fluorescente distinta. El anticuerpo fluorescente rojo tiñó el DNA dentro del núcleo y el anticuerpo fluorescente verde tiñó una proteína de unión con el telómero que se localiza en la periferia del núcleo. (a: tomada de Thierry Laroche y Susan M. Gasser, Cell 75:543, 1993, Cell por Cell Press. Reimpresa con autorización de Cell Press en el formato de reproducción como libro de texto, vía copyright Clearance Center.) De: Técnicas en biología celular y molecular, Biología celular y molecular. Conceptos y experimentos, 7e Citación: Karp G. Biología celular y molecular. Conceptos y experimentos, 7e; 2017 En: https://accessmedicina.mhmedical.com/DownloadImage.aspx?image=/data/books/2036/karp_c18_fig-18-009.png&sec=153038910&BookID=2036&ChapterSecID=153038861&imagename= Recuperado: October 21, 2017 Copyright © 2017 McGraw-Hill Education. All rights reserved