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Técnicas espectroscópicas. Vodka Fluorescencia Molécula plana Con dobles enlaces conjugados (generalmente aromáticas Pares de electrones desapareados.

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Presentación del tema: "Técnicas espectroscópicas. Vodka Fluorescencia Molécula plana Con dobles enlaces conjugados (generalmente aromáticas Pares de electrones desapareados."— Transcripción de la presentación:

1 Técnicas espectroscópicas

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4 Vodka

5 Fluorescencia Molécula plana Con dobles enlaces conjugados (generalmente aromáticas Pares de electrones desapareados Tamaño relativamente grande Características de las moléculas fluorescentes Ejemplos de moléculas fluorescentes Triptofano Tirosina Fenilalanina Quinina

6 Principio de Frank-Condon s Conversión interna s S 1 S – 10 -8

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8 Corrimiento de Stokes

9 Tiempo de vida y eficiencia cuántica La eficiencia cuántica es la relación entre el número de fotones emitidos y el número de fotones absorbidos Donde Γ es la velocidad de emisión del fluoróforo y k nr es la velocidad de decaimiento no radiativo Cercano a la unidad

10 El tiempo de vida de la fluorescencia determina el tiempo de permanencia del estado excitado antes de retornar al estado basal.

11 Moléculas similares con tiempos de vida y eficiencias cuánticas diferentes

12 Apagamiento de la fluorescencia Apagamiento colisional (estado excitado) Donde K es la constante de Stern- Volmer, k q es la constante de apagamiento bimolecular, τ 0 es el tiempo de vida sin apagador y [Q] es la concentración de apagador

13 Apagadores Oxígeno Halógenos Aminas Acrilamida Apagamiento estático: formación de complejos no fluorescentes con el apagador.

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15 Anisotropía de la fluorescencia Provee información sobre el tamaño y la forma de las proteínas o rigidez del medio Asociaciones proteína- proteína, fluidez de la membrana Fotoselección

16 Tamaños

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20 Transferencia de energía por resonancia (RET, FRET)

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24 Fluorescencia - Intrínseca - Extrínseca - Triptofano - Tirosina - Fenilalanina - Cloruro de dansilo - 1-anilino-8-naftaleno sulfonato

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29 Efectos de solvente

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32 Dicroísmo circular Debida a la absorción preferencial de luz circularmente polarizada

33 Radiación electromagnética

34 Polarización de la Luz

35 Interactive animations of electromagnetic waves András Szilágyi Institute of Enzymology, Hungarian Academy of Sciences

36 Vertically (y axis) polarized wave having an amplitude A, a wavelength of and an angular velocity (frequency * 2 ) of, propagating along the x axis. GNUPLOT: equation plotting program

37 Vertical Horizontal Plane-polarized light

38 Right circular Left circular Circularly polarized light

39 Interaction of light and matter: Absorption Material with an extinction coefficient The light gets weaker (its amplitude drops) In Out

40 Interaction of light and matter: Refraction In Out Material with an index of refraction n The light slows down inside the material, therefore its wavelength becomes shorter and its phase gets shifted

41 Circular dichroism In Out Material having different extinction coefficients for right and left circularly polarized lights: R and L Plane-polarized light becomes elliptically polar

42 Circular bi-refringence In Out Material having different refraction indices for right and left circularly polarized lights: n R and n L The plane of polarization of plane- polarized light gets rotated

43 Circular dichroism AND bi-refringence In Out Material having different extincion coefficients AND refraction indices for right and left circularly polarized lights: R and L AND n R and n L Plane polarized light gets elliptically polar, with the great axis of the ellipse being rotated relative to the original plane of polarization

44 Web Tutorial I. Basic concepts: Electromagnetic waves and types of polarization Plane-polarized wave: Horizontal Plane-polarized wave: Vertical Superposition of plane-polarized waves: Horizontal + Vertical 45º Plane Superposition of plane-polarized waves: Horizontal + Vertical Right circular Superposition of plane-polarized waves: Horizontal + Vertical Left circular Circularly polarized waves: Right and Left Superposition of circularly polarized waves: Right + Left circular Plane! II. Interaction of light and matter Plane-polarized wave: Absorption Circularly polarized wave: Absorption Plane-polarized wave: Refraction Circularly polarized wave: Refraction Circular dichroism Circular birefringence Circular dichroism AND birefringence

45 EMANIM Public domain software Source code and Windows binary available In English and Hungarian

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50 Estructura secundaria

51 A. Triosafosfato isomerasa (H:0.52, S:0.14, T:0.11, O:0.23) B. Lisozima (H:0.36, S:0.09, T:0.32, O:0.23) C. Mioglobina (H:0.78, S:0.0, T:0.12, O:0.10) D. Quimotripsina (H:0.10, S:0.34, T:0.20, O:0.36)

52 Cambios conformacionales

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