Técnicas espectroscópicas

Presentación del tema: "Técnicas espectroscópicas"— Transcripción de la presentación:

1 Técnicas espectroscópicas

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4 Vodka

5 Fluorescencia Características de las moléculas fluorescentes
Molécula plana Con dobles enlaces conjugados (generalmente aromáticas Pares de electrones desapareados Tamaño relativamente grande Ejemplos de moléculas fluorescentes Tirosina Triptofano Quinina Fenilalanina

6 S1→S0 10-12 – 10-8 Principio de Frank-Condon 10-15 s
Conversión interna s S1→S – 10-8

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8 Corrimiento de Stokes

9 Tiempo de vida y eficiencia cuántica
La eficiencia cuántica es la relación entre el número de fotones emitidos y el número de fotones absorbidos Donde Γ es la velocidad de emisión del fluoróforo y knr es la velocidad de decaimiento no radiativo Cercano a la unidad

10 El tiempo de vida de la fluorescencia determina el tiempo de permanencia del estado excitado antes de retornar al estado basal.

11 Moléculas similares con tiempos de vida y eficiencias cuánticas diferentes

12 Apagamiento de la fluorescencia
Apagamiento colisional (estado excitado) Donde K es la constante de Stern-Volmer, kq es la constante de apagamiento bimolecular, τ0 es el tiempo de vida sin apagador y [Q] es la concentración de apagador

13 Apagadores Oxígeno Halógenos Aminas Acrilamida
Apagamiento estático: formación de complejos no fluorescentes con el apagador.

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15 Anisotropía de la fluorescencia
Provee información sobre el tamaño y la forma de las proteínas o rigidez del medio Asociaciones proteína-proteína, fluidez de la membrana Fotoselección

16 Tamaños

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20 Transferencia de energía por resonancia (RET, FRET)

21 Transferencia de energía por resonancia (RET, FRET)

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24 - Triptofano - Intrínseca - Fenilalanina - Tirosina Fluorescencia - Cloruro de dansilo - Extrínseca - 1-anilino-8-naftaleno sulfonato

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29 Efectos de solvente

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32 Dicroísmo circular Debida a la absorción preferencial de luz circularmente polarizada

33 Radiación electromagnética

34 Polarización de la Luz

35 Interactive animations of electromagnetic waves
András Szilágyi Institute of Enzymology, Hungarian Academy of Sciences

36 GNUPLOT: equation plotting program
Vertically (y axis) polarized wave having an amplitude A, a wavelength of and an angular velocity (frequency * 2) of , propagating along the x axis.

37 Plane-polarized light
Vertical Horizontal

38 Circularly polarized light
Right circular Left circular

39 Interaction of light and matter: Absorption
Material with an extinction coefficient  The light gets weaker (its amplitude drops) In Out

40 Interaction of light and matter: Refraction
Material with an index of refraction n The light slows down inside the material, therefore its wavelength becomes shorter and its phase gets shifted In Out

41 Circular dichroism Material having different extinction coefficients for right and left circularly polarized lights: R and L Plane-polarized light becomes elliptically polar In Out

42 Circular bi-refringence
Material having different refraction indices for right and left circularly polarized lights: nR and nL The plane of polarization of plane- polarized light gets rotated In Out

43 Circular dichroism AND bi-refringence
Material having different extincion coefficients AND refraction indices for right and left circularly polarized lights: R and L AND nR and nL Plane polarized light gets elliptically polar, with the great axis of the ellipse being rotated relative to the original plane of polarization In Out

44 Web Tutorial http://www.enzim.hu/~szia/cddemo/edemo0.htm
I. Basic concepts: Electromagnetic waves and types of polarization Plane-polarized wave: Horizontal Plane-polarized wave: Vertical Superposition of plane-polarized waves: Horizontal + Vertical  45º Plane Superposition of plane-polarized waves: Horizontal + Vertical  Right circular Superposition of plane-polarized waves: Horizontal + Vertical  Left circular Circularly polarized waves: Right and Left Superposition of circularly polarized waves: Right + Left circular  Plane! II. Interaction of light and matter Plane-polarized wave: Absorption Circularly polarized wave: Absorption Plane-polarized wave: Refraction Circularly polarized wave: Refraction Circular dichroism Circular birefringence Circular dichroism AND birefringence

45 EMANIM http://www.enzim.hu/~szia/emanim Public domain software
Source code and Windows binary available In English and Hungarian

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50 Estructura secundaria

51 A. Triosafosfato isomerasa (H:0.52, S:0.14, T:0.11, O:0.23)
B. Lisozima (H:0.36, S:0.09, T:0.32, O:0.23) C. Mioglobina (H:0.78, S:0.0, T:0.12, O:0.10) D. Quimotripsina (H:0.10, S:0.34, T:0.20, O:0.36)

52 Cambios conformacionales

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