Internalización y liberación del colesterol en el endosoma: Papel de los dominios extracelulares del receptor de LDL Juan Martínez Oliván Director: Javier.

Presentación del tema: "Internalización y liberación del colesterol en el endosoma: Papel de los dominios extracelulares del receptor de LDL Juan Martínez Oliván Director: Javier."— Transcripción de la presentación:

1 Internalización y liberación del colesterol en el endosoma: Papel de los dominios extracelulares del receptor de LDL Juan Martínez Oliván Director: Javier Sancho

2 Estructura y ciclo del rLDL

3 Mecanismo competitivo
Mecanismo clásico propuesto de internalización del colesterol Mecanismo competitivo Basado en la estructura de Rayos X del rLDL a pH endosomal y alta [Ca2+]

4 Estudio del dominio de unión: el módulo quinto (LR5)
El módulo fundamental del dominio de unión Une tanto lipoproteínas como al β-Propeller Consta de 40 aminoácidos Posee 3 puentes disulfuro y un centro de coordinación de Ca2+

5 Propiedades de LR5 LR5-Ca2+ pH 7 LR5-Mg2+ pH 7 LR5-Ca2+ pH 5.5 Kd (µM) 0.78 45 30 1700 Une Ca2+ y Mg2+ Propuesta de nuevo mecanismo de internalización y liberación de colesterol Ph 7, ↑↑ [Ca2+] Ph 7, ↓↓ [Ca2+] pH 5.5, ↓↓ [Ca2+] Tm (ºC) 72.3 41.9 36.9 Inestable a bajo pH y baja [Ca2+] LR5-Ca2+ pH 7 LR5-Mg2+ pH 5.5 Asociación (M-1 s-1 ) 1.1*106 6700 8.0*104 6200 Disociación ( s-1 ) 1.2 10.4 5.15 19.7 Cinética rápida liberación Ca2+ y asociación Mg2+

6 Mecanismo de internalización y liberación del colesterol propuesto
Bajo pH Baja [Ca2+] Alta [Mg2+]

7 Ampliación del estudio del dominio de unión: LR4, LR4-5 y LR1-7

8 Estudio del dominio hómologo a EGF: El β-propeller
CHOK1 CHOlec Expresión en células CHO Análisis de estabilidad e interacciones LR4, LR5, LR4-5, LR1-7, PCSK9 Caracterización de mutantes causantes de enfermedad Búsqueda de Farmacochaperonas

9 Han participado en este proyecto
Javier Sancho, IP del Proyecto, BIFI-UZ Xabier Arias, Socio Fundador, BIFI-UZ Colaboradores BIFI-UZ: Colaboradores externos: Jose Alberto Carrodeguas Ramón Hurtado Erandi Lira Adrián Velázquez Óscar Millet , Structural Biology Unit, CIC bioGUNE Salvador Ventura, Institut de Biotecnología i Biomedicina, Universitat Autónoma de Barcelona