DESIGNING INHIBITORS AGAINST THE CAPSID PROTEIN OF HIV-1 José Luis Neira Instituto de Biología Molecular Universidad Miguel Hernández

Presentación del tema: "DESIGNING INHIBITORS AGAINST THE CAPSID PROTEIN OF HIV-1 José Luis Neira Instituto de Biología Molecular Universidad Miguel Hernández"— Transcripción de la presentación:

1 DESIGNING INHIBITORS AGAINST THE CAPSID PROTEIN OF HIV-1 José Luis Neira Instituto de Biología Molecular Universidad Miguel Hernández jlneira@umh.es

2 Universidad de Zaragoza y BIFI Olga Abian Marta Bueno Javier Sancho Adrián Velázquez-Campoy Centro de Biología Molecular Severo Ochoa (CSIC) Rebeca Bocanegra Marta del Álamo Mauricio G. Mateu Universidad Miguel Hernández Francisco Barrera Rosa Doménech Javier Gómez María del Carmen Lidón José Luis Neira Universidad de Granada Raúl Pérez Jiménez Instituto de Química Médica (CSIC) Rosario González-Muñiz School of Medical Sciences (Texas University) Claudio Cavassoto

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4 Estabilidad Estabilidad y caracterización biofísica Estabilidad del dominio (energética) Estructura de un monómero de CAC Dinámica y estructura Unión a otras biomoléculas Lípidos Péptidos Moléculas orgánicas: dendrímeros

5 N2N2 2N2N’2U FTIR NMR Anisotropía CD ultravioleta cercano ANS FTIR Absorbancia NMR CD ultravioleta lejano Fluorescencia 22 2 Desnaturalización química seguida por fluorescencia Filtración en gel Desnaturalización química seguida por ultravioleta lejano 1.1. Estabilidad y caracterización biofísica

6 Residuos críticos, reducen mucho la afinidad Residuos incrementan la afinidad Residuos no muy críticos, no alteran la afinidad Residuos que reducen algo la afinidad 1.2. Estabilidad del dominio (energética)

7 2. Estructura de un monómero de CAC

8 PS CAC PAPC PC/SM/Cho PS PA PC PC/SM/Cho 3.1. Unión a otras biomoléculas: lípidos

9 Zonas predichas que interactúan fuertemente Zonas predichas que interactúan más débilmente

10 3.2. Unión a otras biomoléculas: péptidos Ac-QASQEVK(Antra)NWMTETLLVQNA-NH 2 MSPTSILDIRQGPKEPFRDYVDRFYKTLRAEQASQEVKNWMTETLLVQNANPDCKTILKALGPAATLEEM (a) El ligando natural

11 Anisotropía [  ] (deg cm 2 dmol -1 ) [CAC1] (  M) Número de onda (nm) Constante de autoasociación de 15  M. Similar a la de CAC intacta (12  M )

12 Péptido CAC Suma Complejo

13 Intensidad de fluorescencia a 412 nm (u.a.) [CAC1] (  M) Diferencia de volúmenes (l -1 ) Determinación de la afinidad por cromatografía de afinidad Determinación de la afinidad por fluorescencia [CAC1] (  M)

14 Ac-ESASSVKAWMTETLLVQNA-NH 2 D = 1.5 (  0.3) x 10 -6 cm 2 s -1 Ac-SESAASSVKAWMTETLLVANTSS-NH 2 D = 3.5 (  0.5) x 10 -6 cm 2 s -1 Ac-QASQEVKNWMTETLLVQNA-NH 2 (b) Modificando el ligando natural (b.1) Mejorando la solubilidad

15 Ac-QASQEVKNWMTETLLVQNA-NH 2 P-1 Ac-VKNWMTETLLRQ-NH 2 P-2 Ac-VKNWMTEYLLVQ-NH 2 P-3 Ac-VKNWMTEYLLRQ-NH 2 P-4 Ac-VKNWMTETLLVQ-NH 2 (b.1) Mejorando la helicidad No hay aumento experimental de la helicidad, pero hay unión a CAC

16 P-1P-2 P-4 P-3

17 3.3. Unión a moléculas orgánicas : dendrímeros

18 Calorimetría de titulación isotérmica: ITC Inhibición del ensamblaje de la proteína de la cápsida

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20 Diseño de péptidos capaces de unirse a CAC e inhibir el ensamblaje de CA: comprendiendo (o no entendiendo nada) como la helicidad domina la tendencia a inhibir el ensamblaje (aumentando la solubilidad) Diseño de moléculas orgánicas (dendrímeros) capaces de unirse a CAC e inhibir el ensamblaje de CA