cDNAs de isoformas de PKC

Presentación del tema: "cDNAs de isoformas de PKC"— Transcripción de la presentación:

1 cDNAs de isoformas de PKC
a bovino cerebro humano cerebro, células T rata, conejo cerebro ratón cerebro, fibroblastos bI rata, conejo cerebro humano bazo bII bovino cerebro humano cerebro, bazo rata, ratón, cerebro conejo cerebro g bovino cerebro humano cerebro rata, conejo cerebro d rata cerebro ratón cerebro, células mieloides e conejo, rata cerebro ratón cerebro z rata cerebro humano células mieloides h ratón piel humano queratinocitos rata pulmón q ratón piel Convencionales Novel Atípica

2 PRKs (PKC related kinases)
PKC CONVENCIONALES: Activadas por PS en forma dependiente de Ca2+ Unen DAG Blanco de PMA PKC NUEVAS: Insensibles a Ca2+ Activadas x DAG y PMA en presencia de PS PKC ATIPICAS No responden a PMA/DAG PRKs (PKC related kinases) Insensibles a Ca2+, DAG o PMA Se unen a Rho activo

3 Dendograma basado en comparación de secuencia de familia de PKCs

4 ESTRUCTURA DE LOS DOMINIOS DE LAS SUBFAMILIAS DE PKC

5 DOMINIO C1 Presente en cPKCs y nPKC Dos dedos de Zn: C1a y C1b Motivo:
H – X12 – C – X2- C – X13/14 – C – X2 – H – X2 – C – X7 – C Sitio de unión para DAG y PMA

6 PROTEINAS QUE CONTIENEN DOMINIOS C1
Proteína Dedo Zn Unión a PMA Comentario DAG kinasa No C1 no necesario para unión de DAG o catálisis Quimerina Sí PMA estimula actividad tipo GAP contra Rac PKD Sí Activada x PMA y DAG Munc n.h Homólogo mamífero de Unc-13; sinaptosomal Raf No C1 se une a prenilo de Ras Ksr n.h Kinasa relacionada a Raf Vav Sí GEF para Ras Stac n.h proteína de cerebro con SH3

7 DOMINIO C2 Presente en otras proteínas: sinaptotagmina, rabfilina, PLs, GAPs Confiere unión a PS/Ca2+ Estructura : Sandwich b compacto: 2 x 4 hojas antiparalelas 5 Asp para unión de Ca2+ Ausente en nPKCs y aPKC, pero ~ a Vo (faltan algunos Ds) Función : interacción con otras proteínas C2A y C2B de syn.: sintaxina y clatrina AP2 RACKs (Receptor for Activated PKCs): no sustrato, sí unión lleva a membrana

8 DOMINIO HR1 3 repeticiones de 55 aa Une Rho? Conservado básico
Conservado acídico Conservado hidrofóbico

9 Dominio C1 Dominio C2 Dominios C3+C4 PMA catalítico Zn Zn Unión de S
Unión de nucleótido Dominios C3+C4 catalítico Dominio C1 Zn Zn Unión de S Aspx5  Dominio C2 (sinaptotagmina) conservados

10 ESTRUCTURA PRIMARIA DE LAS FAMILIAS DE PKC

11 MODELO DE REGULACION DE cPKC
pseudoS 2 transPi 1 4 autoPi 3 autoPi

12 Regulación mediada por PKC

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16 LIGANDO LIGANDO (hormonas, etc) RECEPTOR TRANSMISOR (e.g.Proteinas G)
EFECTOR SEGUNDO MENSAJERO BLANCO 1 BLANCO 2 BLANCO 3 EXPRESION DE GENES (hormona, factores de crec. citokinas) (Ad.ciclasa, PLs, PI3Ks, otros) cAMP, DAG,Ca PIP3, otros PKA, PKB, PKC Raf,MAPK, S6K CREB, myc, fos, jun, NF-kB LIGANDO (hormonas, etc) RECEPTOR