El promotor Pu del plasmido TOL. CH3 COOH CH3 OH CH3 TCA Xyl UWCMABN Operón superior (upper) Xyl XYZL toluato dioxigenasa Xyl TEGFJQKIH C2,3O et al Operón.

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1 El promotor Pu del plasmido TOL

2 CH3 COOH CH3 OH CH3 TCA Xyl UWCMABN Operón superior (upper) Xyl XYZL toluato dioxigenasa Xyl TEGFJQKIH C2,3O et al Operón inferior (meta) El sistema TOL de Pseudomonas putida

3 xylUWCMABN PuPm xylXYZLTEGFJQKIHxylS PsPr xylR operón upper operón meta benzoato m, p-xileno La regulación del sistema TOL benzoato CH 3 R COOH R

4 Organización del promotor Pu ARNpol  54 IHF XylR CH 3 R -24/-12 -79/-52 +1 UAS distal -173/-162 UAS proximal -135/-124

5 XylRIHF E  54 La curvatura del ADN en Pu -24/-12-79/-52-175/-124 + La curvatura de IHF... Acerca proteinas distantes Ayuda a reclutar la ARNP Suprime la activación promiscua

6 El regulador transcripcional XylR A (receptor) Interdominio B Unión ATP C (activación) D HTH Unión a ADN en Pu y Ps COOH NH 2 211233 Reconocimiento y unión del efector Hidrólisis ATP Multimerización Contacto-  54

7 R R XylR activo B D A C XylR inactivo Represión intramolecular, Interacciones A-C específicas Unión al dominio A Liberación de represión Activación de XylR en respuesta a inductores R

8 XylR∆A es un activador constitutivo A (receptor) C (activación) D HTH C N C (activación) D HTH C N XylR XylR∆A 219

9 ATP ADP+P i ARNpol Iniciación Pu XylR∆A dímero UAS distalUAS proximal Activación de la transcripción en Pu Oligomerización

10 in vivo in vitro

11 Physiological Regulation : the phenomenon.. 0 1 2 3 4 5 6 7 GluGlnFrcGlySuc 0 2 4 6 8 10 12 012 no inducer inducer Growth (OD 600 ) Exponential SilencingCarbon Source Inhibition ß-Gal Activity (Miller U. X1000) lacZ Pu xylR

12 El control fisiológico no depende de XylR XylR (wt)XylR∆A

13 Exponential silencing: the role of  54.. Growth (OD 600 ) Entry into stationary phase

14 Inhibición por Carbono de Pu

15 El cluster rpoN en P. putida

16 EIHPrEII Sugar(out) EI-P HPr-P EII-P Sugar-P(in) Pyruvate PEP

17 Mutaciones en ptsN eliminan la inhibición por carbono

18 1 2 3 4 5 6 7 - GLU + GLU ß-Gal Activity (Miller Units x1000) MAD2 ptsN:: Km ptsN:: Km WT ptsN:: Km ptsN:: Km ptsNH68AptsN68D IIA Ntr PtsN debe fosforilarse para ejercer su acción represora

19 El cluster rpoN en P. putida

20 El papel de pts0. 0 1 2 3 4 5 6 7 MAD2 ptsO::Km ptsOH15A ptsO::Km - GLU + GLU ß-Gal Activity (Miller Units x1000) Npr WT ptsO::Km

21 lacZ Pu xylR NPr~P+IIA NPr+IIA ~P Ntr Glucosa +

22 Controls are independent. - GLU + GLU 0 1 2 3 4 5 6 7 0 0.5 1 1.5 ptsN::Km 0 0.5 1 1.5 MAD2 + GLUWT + Sigma54 Growth (OD 600 ) 1 2 3 4 5 6 7 0 ß-Gal Activity (Miller Units x1000) PtacrpoN

23 Our current model Specific Regulation Physiological Regulation CH 3 3 XylR IHF  54 -RNAPol Exponential Silencing IIA Ntr Npr